杜泊羊和湖羊及其雜交后代MHC-DRB1外顯子2多態(tài)性分析.pdf

1、綿羊主要組織相容性復(fù)合體（Major histocompitibility complex，MHC）又稱為綿羊淋巴細(xì)胞表面抗原（Ovine Lymphocyte Antigen，OLA），是由緊密連鎖、高度多態(tài)的基因位點組成染色體上的一個遺傳區(qū)域，包含三個基因區(qū)域：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。它們所編碼的蛋白稱為MHC抗原或MHC分子，在抗原呈遞、引發(fā)免疫反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。而且MHC與許多動物疾病的抗性、易感性、免疫應(yīng)答以及生產(chǎn)性能都有密切

2、關(guān)系。目前綿羊MHC的多態(tài)性主要集中在MHCⅡ類分子的DR和DQ基因座，DR所編碼抗原功能區(qū)（抗原結(jié)合區(qū)）的第2外顯子具有多態(tài)性。已成為分子免疫遺傳領(lǐng)域的研究熱點之一。
　　本研究應(yīng)用PCR-RFLP方法，對杜泊羊和湖羊以及杜泊-湖羊雜交后代(杜-湖F1)OLA-DRB1基因外顯子2的遺傳多態(tài)性進(jìn)行檢測，分析了其多態(tài)性與支原體肺炎易感性的關(guān)聯(lián)性，目的是為今后綿羊抗病育種工作奠定基礎(chǔ)。本文主要結(jié)論如下：
　　1.應(yīng)用PCR-R

3、FLP方法，對403只湖羊、283只杜泊羊和125只杜泊-湖羊雜交一代的MHC-DRB1基因外顯子2進(jìn)行了遺傳多態(tài)性檢測，結(jié)果顯示，MHC-DRB1基因第二外顯子在SacⅡ、SacⅠ、Hin1Ⅰ、Mval和HaeⅢ5個酶切位點在3個綿羊群體存在豐富的多態(tài)性。湖羊共出現(xiàn)15個等位基因，26種基因型；杜泊羊共發(fā)現(xiàn)14個等位基因，25種基因型，雜交一代中共出現(xiàn)14個等位基因，23種基因型。
　　2.用x2適合性檢驗對三個群體MHC-DR

4、B1基因外顯子2是否處于hardy-weinberg平衡狀態(tài)進(jìn)行了檢測。結(jié)果顯示：杜泊羊，湖羊和杜-湖F1代在SacⅡ、SacⅠ、Hin1Ⅰ、Mval、HaeⅢ5個位點均未達(dá)到hardy-weinberg平衡狀態(tài)。
　　3. MHC-DRB1等位基因和基因型的χ2檢驗結(jié)果表明：湖羊中HaeⅢee(P<0.01)和Mval bb(P<0.01)基因型較多，由于湖羊?qū)χгw肺炎易感，提示基因型HaeⅢee和Mval bb是支原體肺炎的

5、易感基因型。而HaeⅢ dd(P<0.01)和Mval cc(P<0.01)、多見于杜泊羊和杜-湖F1，而杜泊羊及其雜交后代的對本病有一定抵抗力，所以推測基因型HaeⅢdd和Mval cc是支原體肺炎的抗性基因型。以上基因型與支原體肺炎的易感性和抗性關(guān)系還需要進(jìn)行攻毒等試驗加以驗證。對其余的基因型頻率差異不顯著或不具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.結(jié)合相關(guān)資料，對7個綿羊群體的MHC-DRB1基因外顯子2的遺傳分析表明：MHC-DRB1基