山羊GDF9基因的克隆及外顯子多態(tài)性研究.pdf

1、GDF9屬于TGF-β超家族成員，是由卵母細胞分泌的一種生長分化因子，以旁分泌的形式調(diào)控卵泡細胞的生長和分化，并對卵巢顆粒細胞、膜細胞的生長和孕酮生成起重要作用。同TGF-β超家族其他成員一樣，GDF9也是通過單跨膜的與Ser/Thr激酶偶聯(lián)的受體介導信號轉(zhuǎn)導，最終信號入核調(diào)控卵泡細胞基因表達。因此，GDF9被視為影響哺乳動物繁殖性能的主要候選基因。 實驗選用濟寧青山羊145只，魯北白山羊60只，萊蕪黑山羊60只作為實驗材料。選

2、取GDF9基因作為影響其繁殖性能的候選基因，對這一基因進行克隆測序，并對其外顯子進行PCR-SSCP和RFLP分析和序列比對，對所發(fā)現(xiàn)的多態(tài)位點進行分析，以期尋找出各品種山羊中的優(yōu)勢基因型，為山羊的遺傳育種提供實驗和理論依據(jù)。所得結(jié)果如下： 1.根據(jù)綿羊GDF9基因外顯子序列設計引物，應用PCR和RACE技術進行山羊GDF9基因的擴增。擴增的基因全長為4715bp，包含有兩個外顯子和一個內(nèi)含子，并已經(jīng)提交NCBI Gen Ban

3、k(登錄號：EF446168)。同綿羊GDF9基因序列相比，同源性為98％。 2.采用PCR-SSCP和PCR-RFLP技術對山羊GDF9基因兩個外顯子進行多態(tài)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在第一外顯子的1956位點和第二外顯子的3855和4085位點均存在多態(tài)位點。進一步的測序結(jié)果表明，1956位點發(fā)生了由A→C的突變，3855和4085位點分別發(fā)生了由A→C和G→A的突變。1956位點的突變并沒有引起所編碼的氨基酸的變化，3855和40

4、85位點的突變則分別導致了所編碼的氨基酸由Pro→Gin和Ile→Val的改變。 3.對三種山羊外顯子進行基因型和多態(tài)性分析顯示，對于E1-2片段，在三種山羊品種中均檢測到了AA，AC和CC基因型，并均以AA型居多，在3個山羊群體中，A等位基因頻率明顯高于T等位基因頻率。魯北白山羊為低度多態(tài)。而萊蕪黑山羊和濟寧青山羊為中度多態(tài)。對于E2-3片段，在三個山羊品種中均檢測到了AA，AC和CC基因型，魯北白山羊，萊蕪黑山羊均以AA型居