N6對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、第一部分:
　　 N6對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:
　　 研究N6（促神經(jīng)再生因子復(fù)合劑）對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法:
　　 采用Allen's法經(jīng)NYU脊髓損傷撞擊器制作大鼠急性SCI模型，實(shí)驗(yàn)共分4組:假手術(shù)組（A組，只摘除椎板未損傷脊髓），單純脊髓損傷組（B組），脊髓損傷+生理鹽水治療組（C組），脊髓損傷+N6治療組（D組）。損傷后72h取材，采用H

2、E染色對(duì)脊髓組織進(jìn)行標(biāo)記;免疫組化方法檢測(cè)Caspase3蛋白的表達(dá);逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Caspase3、Fas、Bax、Bcl2、P53mRNA在脊髓組織中的表達(dá)變化，Western-Blot檢測(cè)各組脊髓組織中凋亡相關(guān)蛋白Bcl2的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果:
　　 免疫組化結(jié)果顯示A組Caspase3陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)很少;B組及C組Caspase3陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)較A組明顯增加(P＜0.0

3、5);D組較B、C陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)明顯減少(P＜0.05)。RT-PCR檢測(cè)到Caspase-3、Fas、P53mRNA水平D組較B、C組明顯降低(P＜0.05);Bcl2/Bax值，D組較B、C組明顯升高(P＜0.05)。Western-Blot結(jié)果示:A組Bcl2大量表達(dá)，B、C組明顯降低，D組較B、C組明顯升高，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 N6（促神經(jīng)再生因子復(fù)合劑）能明顯抑制脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。

4、
　　 第二部分:
　　 N6抑制谷氨酸介導(dǎo)培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:
　　 探討N6（促神經(jīng)再生因子復(fù)合劑）在谷氨酸介導(dǎo)的脊髓神經(jīng)元凋亡過(guò)程中所起的保護(hù)作用。
　　 方法:
　　 取妊娠13dWistar大鼠的胎鼠，分離出脊髓神經(jīng)細(xì)胞并進(jìn)行體外原代神經(jīng)元的純化培養(yǎng)，建立谷氨酸對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的損傷模型，觀察加用N6保護(hù)后細(xì)胞形態(tài)的變化，用吖啶橙(AO)、溴化已啶(EB)、H

5、ochest熒光染色法、Tunel法觀測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù)量的變化，CCK8檢測(cè)細(xì)胞活性的變化;實(shí)驗(yàn)分為3組:對(duì)照組（C組），谷氨酸損傷組(Glu組)，谷氨酸損傷+N6處理組（N6組）;每組4個(gè)平行皿，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
　　 結(jié)果:
　　 C組凋亡細(xì)胞少見;Glu組凋亡細(xì)胞明顯增加，細(xì)胞活性明顯降低;N6組凋亡細(xì)胞數(shù)明顯減少，細(xì)胞活性明顯增加，結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 促神經(jīng)再生因子