脊髓損傷后促紅細胞生成素對神經(jīng)營養(yǎng)因子及神經(jīng)細胞凋亡的影響.pdf

1、促紅細胞生成素(EPO)是一種分子量約34 kd，含唾液酸的酸性糖蛋白。EPO以往一直被認為僅在腎臟分泌，是一種作用于骨髓造血細胞，促進紅系祖細胞增生、分化、最終成熟的內(nèi)分泌激素。目前發(fā)現(xiàn)，除腎臟外，肝、肺、脾、胎盤、生殖器官等多個組織器官有EPO分泌，中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中也存在EPO及EPO受體(EpoR)基因的廣泛表達；EPO除了對紅細胞生成至關(guān)重要外，是具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用的多功能營養(yǎng)因子和神經(jīng)保護因子，對CNS的發(fā)育起重要

2、的調(diào)節(jié)作用并對CNS損傷有很好的神經(jīng)保護作用，因此受到廣泛關(guān)注。 本研究擬在脊髓損傷后不同時間應(yīng)用促紅細胞生成素干預(yù)，探討其對神經(jīng)運動功能和繼發(fā)性病理改變的保護作用及對神經(jīng)營養(yǎng)因子表達和神經(jīng)細胞凋亡的影響。 第一部分脊髓損傷后促紅細胞生成素對NGF、NT-3表達的影響 目的：神經(jīng)生長因子(NOF)和神經(jīng)營養(yǎng)因子-3(NT-3)是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族的主要成員，是機體產(chǎn)生的能夠促進神經(jīng)細胞存活、生長、分化的一類多肽或蛋

3、白質(zhì)因子。它能阻止神經(jīng)元損傷后的死亡，促進神經(jīng)元的修復(fù)、軸突再生調(diào)節(jié)突觸可塑性和神經(jīng)遞質(zhì)傳遞等神經(jīng)系統(tǒng)功能，是反映脊髓修復(fù)的重要觀察指標(biāo)。 本研究在脊髓損傷后不同時間應(yīng)用促紅細胞生成素，探討其對神經(jīng)運動功能和繼發(fā)性病理改變的保護作用及對神經(jīng)生長因子和神經(jīng)營養(yǎng)因子-3表達的影響。 方法：將Wistar大鼠隨機分為正常組、假手術(shù)組、對照組、實驗組。按改良Allen打擊法建立大鼠的脊髓不完全損傷模型，實驗組分別于脊髓損傷后1小

4、時、6小時、24小時腹腔注射rhEPO，5000ku/kg。通過動物神經(jīng)運動功能評分和組織學(xué)染色評價神經(jīng)損傷程度；采用免疫組織化學(xué)染色檢測神經(jīng)生長因子和神經(jīng)營養(yǎng)因子-3的表達水平。 結(jié)果：在脊髓損傷后48小時，rhEPO1小時、6小時處理組神經(jīng)運動功能和繼發(fā)性病理損害明顯改善，斜板實驗角度(43.5±3.45：42±1.98)與同期對照組相比明顯提高；免疫組化顯示脊髓神經(jīng)生長因子和神經(jīng)營養(yǎng)因子-3表達明顯上升，差異有顯著性；而術(shù)

5、后24小時處理組與同期對照組相比，脊髓神經(jīng)細胞神經(jīng)生長因子和神經(jīng)營養(yǎng)因子-3表達上升均無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：早期應(yīng)用外源性EPO對脊髓不完全損傷后引起的神經(jīng)運動功能損害及繼發(fā)性病理改變具有保護作用，此種保護作用可能與EPO能夠增加神經(jīng)營養(yǎng)因子-3和神經(jīng)生長因子表達，保護受損神經(jīng)元促進脊髓再生有關(guān)。 第二部分脊髓損傷后促紅細胞生成素對Caspase-3表達的影響 目的：半胱氨酸蛋白酶(Caspase)被認為是細胞凋

6、亡過程中最重要的一系列蛋白酶，其中Caspase一3是最重要的蛋白酶，是多種凋亡途徑的共同下游效應(yīng)部分。本研究在大鼠脊髓損傷后不同時間腹腔注射促紅細胞生成素，探討其對Caspase-3表達的影響。 方法：將Wistar大鼠隨機分為正常組，假手術(shù)組，空白對照組，rhEPO處理組。按改良Allen打擊法建立大鼠的脊髓不完全損傷模型，通過動物神經(jīng)運動功能評分和組織學(xué)染色評價神經(jīng)損傷程度；采用免疫組織化學(xué)染色檢測脊髓神經(jīng)細胞Caspas

7、e-3的表達水平。 結(jié)果：與對照組相比，脊髓損傷后rhEPO1小時，6小時處理組神經(jīng)運動功能和繼發(fā)性病理損害明顯改善，脊髓Caspase-3的表達明顯下降(P<0.01)，；而術(shù)后24小時組與對照組相比，脊髓神經(jīng)細胞凋亡指數(shù)及Caspase-3的表達下降均無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：早期應(yīng)用外源性EPO對脊髓不完全損傷后引起的神經(jīng)運動功能損害及繼發(fā)性病理改變具有保護作用，此種保護作用可能與EPO能夠通過減少Caspase-3的

8、表達，從而減輕繼發(fā)性的神經(jīng)細胞凋亡有關(guān)。 第三部分脊髓損傷后促紅細胞生成素對神經(jīng)細胞凋亡的影響 目的：神經(jīng)細胞凋亡是脊髓繼發(fā)性損傷的重要病理學(xué)的改變。本研究在大鼠脊髓損傷后不同時間腹腔注射促紅細胞生成素，探討其對神經(jīng)細胞凋亡的影響。 方法：將Wistar大鼠隨機分為正常組，假手術(shù)組，對照組，實驗組。按改良Allen打擊法建立大鼠的脊髓不完全損傷模型，通過動物神經(jīng)運動功能評分評價神經(jīng)損傷程度；采用TUNEL法檢測脊