AVBD6對(duì)細(xì)菌感染和應(yīng)激的響應(yīng)及對(duì)CLEAP-2表達(dá)的影響.pdf

1、β防御素是一類具有廣譜抗菌活性的內(nèi)源性小分子陽離子抗菌肽。禽類吞噬細(xì)胞缺乏氧依賴性殺菌機(jī)制，其對(duì)細(xì)菌的清除更依賴于陽離子抗菌肽。AvBD6是β防御素家族成員之一，是有前景的新型抗生素替代品。
　　目前，關(guān)于禽β防御素的定量研究報(bào)道較少，而定量研究是深入理解禽β防御素病理生理學(xué)意義及臨床應(yīng)用的基礎(chǔ)。因此，本研究擬通過建立檢測(cè) AvBD6的夾心ELISA法，檢測(cè)不同病理生理狀態(tài)下血清或組織中AvBD6的濃度；同時(shí)，還探討外源性AvBD

2、6對(duì)雞肝臟分泌抗菌肽（LEAP-2）表達(dá)量的影響。主要研究結(jié)果如下：
　　1、建立檢測(cè)AvBD6的夾心ELISA法
　　鼠源包被抗體的免疫原是KLH偶聯(lián)的AvBD6的B細(xì)胞線性表位（PGPCRW-KLH）。兔源檢測(cè)抗體的免疫原是KLH偶聯(lián)的AvBD6的N端（SPIHACRYQRGV-KLH）。包被抗體、檢測(cè)抗體和辣根過氧化酶標(biāo)記的羊抗兔IgG的最佳工作稀釋倍數(shù)，分別為2500、2000和10000。在20~320 ng/mL

3、的線性范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：y=12024x-2583，（其中y為AvBD6合成肽濃度，x為OD450，R2=0.9842）。
　　2、不同病理生理?xiàng)l件下AvBD6濃度測(cè)定
　　隨沙門氏菌感染時(shí)間推移，雞十二指腸中 AvBD6的濃度（由34.88 ng/mL至122.64 ng/mL）、空腸中AvBD6的濃度（由45.015 ng/mL至183.39 ng/mL）和血清中AvBD6的濃度（由7320.38 ng/mL

4、至7855.56 ng/mL）均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，且與同時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組差異顯著（P<0.05）。大腸桿菌感染組血清中的AvBD6濃度（7641.49 ng/mL）比同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組高，且差異顯著（P<0.05）。隨著冷應(yīng)激時(shí)間延長，血清中AvBD6的濃度（由502.095 ng/mL至1525.75 ng/mL）呈上升趨勢(shì)，且在刺激12h之后其濃度（3666.12 ng/mL）顯著上調(diào)。在注射ACTH（25 IU/kgBW）1d后，AvBD6

5、濃度（1245.60 ng/mL）比同時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組略低，而連續(xù)注射5d后，AvBD6濃度（4429.96 ng/mL）升高，但是均與同時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）。
　　3、外源AvBD6對(duì)雞肝臟表達(dá)抗菌肽的影響
　　當(dāng)外源性AvBD6的濃度由20μg/kgBW增高至40μg/kgBW時(shí)，應(yīng)用SABC法檢測(cè)組織中cLEAP-2表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)肝臟和小腸中cLEAP-2的表達(dá)明顯增加，而在脾臟、胸腺、法氏囊僅有少量