睪丸酮對Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡保護機制的研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)是老年人群中高發(fā)的神經系統(tǒng)變性疾病,發(fā)病機制至今尚未完全明確,目前認為伴隨著衰老的體內性激素水平下降是導致AD發(fā)病的重要病因之一。進一步闡明體內性激素在AD發(fā)病中的作用對于AD發(fā)病機制的研究和AD的臨床防治有重要意義。本課題從細胞活性、細胞形態(tài)學、凋亡相關蛋白的表達與凋亡相關基因轉錄水平四個方面觀察睪丸酮對體外培養(yǎng)的嗜鉻細胞瘤(PC12)細胞凋亡活動的影響,為進一步研究AD的發(fā)病

2、機制和臨床治療提供理論依據(jù)。本課題主要包括三個部分:第一部分:睪丸酮對Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡后細胞活性的影響采用MTT分析法檢測睪丸酮對Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡活性的影響。預先以含不同終濃度Aβ25-35的培液孵育PC12細胞24小時后,PC12細胞活性明顯下降,且下降程度與Aβ25-35濃度相關,其IC50大約在20μM左右;進一步我們以含不同濃度睪丸酮的培液預保護12小時,再以20μMAβ25-35誘導PC12

3、細胞凋亡,結果顯示PC12細胞活性下降受到明顯抑制,在一定范圍內隨睪丸酮濃度增加作用增強,其IC50大約在50μM左右;在含睪丸酮培液中加入100μM的氟他胺后,再以20μMAβ25-35誘導PC12細胞凋亡,睪丸酮對PC12細胞保護作用受到明顯抑制。從上述實驗結果可以推斷睪丸酮可以明顯抑制Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡后細胞活性下降,其作用途徑可能受雄激素受體所介導。第二部分:睪丸酮對Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡形態(tài)學影響采

4、用Hochest-PI雙染色法觀察睪丸酮對Aβ25-35誘導PC12細胞凋亡后細胞形態(tài)學的影響,本實驗中我們設置四個處理組:①正常對照組;②睪丸酮預保護組;③Aβ25-35處理組;④氟他胺處理組。Hochest-PI雙染色后發(fā)現(xiàn)Aβ25-35處理組凋亡PC12細胞數(shù)量顯著增加,而睪丸酮保護后凋亡細胞數(shù)量明顯減少,預先予以氟他胺干預后,睪丸酮作用受到明顯抑制。上述實驗結果從形態(tài)學上進一步證實睪丸酮可以抑制Aβ25-35誘導的PC12細胞凋

5、亡活動,第三部分:睪丸酮對PC12細胞凋亡相關調控因子Bcl-xl、Bax表達的影響本部分包括實驗三和實驗四,每次實驗各設4個處理組:①正常對照組;②睪丸酮預保護組;③Aβ25-35處理組;④氟他胺處理組。實驗三采用Western-blot免疫印跡法檢測各實驗組Bcl-xl、Bax的蛋白表達,實驗四采用Real-timePCR檢測各實驗組Bax、Bcl-xlmRNA的表達。實驗結果顯示Aβ25-35處理組PC12細胞Bax蛋白及Baxm

6、RNA表達均明顯上調、Bcl-xl蛋白及Bcl-x1mRNA表達明顯下調(P＜0.05);睪丸酮保護后PC12細胞Bax蛋白及BaxmRNA表達均明顯下調、Bcl-xl蛋白及Bcl-xlmRNA表達明顯上調(P＜0.01);予以氟他胺干預后與睪丸酮保護組相比Bcl-xl蛋白及Bcl-xlmRNA的表達明顯下降、Bax蛋白及BaxmRNA的表達明顯上調(P＜0.05)。因此結合上述實驗結果我們推斷,睪丸酮抗細胞凋亡作用可能與上調Bcl-x