金釵石斛總生物堿對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察金釵石斛總生物堿（Dendrobium nobile Lindle. Alkaloids，DNLA）對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用，并探索其可能的機(jī)制。
　　方法：將PC12細(xì)胞分為空白組（Control）、模型組（Model，10μM Aβ25-35）、金釵石斛總生物堿低劑量組（DNLA-L，0.035mg/LDNLA+10μM Aβ25-35）、金釵石斛總生物堿中劑量組（DNLA-M，0.35 mg

2、/L DNLA+10μM Aβ25-35）、金釵石斛總生物堿高劑量組（DNLA-H，3.5 mg/L DNLA+10μM Aβ25-35），DNLA預(yù)防給藥6 h后加入Aβ25-35，作用24 h。采用MTT比色法觀察DNLA對(duì)PC12細(xì)胞和Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的影響，并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平。Western blot法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase9、pro-caspase3和 Cle

3、aved-caspase3蛋白表達(dá)。通過(guò)熒光倒置顯微鏡應(yīng)用線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒（JC-1）觀察 DNLA對(duì)線粒體膜電位（mitochondrial membrane potential，MMP）的影響。細(xì)胞氧化應(yīng)激水平的檢測(cè)：應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)氧自由基（reactive oxygen species，ROS）水平，生化法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）活性及還原型谷胱甘肽（GSH）含量。
　　結(jié)果：與空白組比較，Aβ25

4、-35誘導(dǎo)的模型組PC12細(xì)胞活力顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著上升；線粒體凋亡通路Bax、Cleaved-caspase9和Cleaved-caspase3蛋白表達(dá)上升， Bcl-2、pro-caspase3表達(dá)下降；細(xì)胞內(nèi)ROS含量上升，SOD活力、GSH含量及MMP明顯降低。與模型組比較，有效劑量的DNLA可顯著改善細(xì)胞活力及細(xì)胞凋亡率；；凋亡相關(guān)蛋白Bax、Cleaved-caspase9和Cleaved-caspase3水平降低，B