2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本文擬從誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的角度出發(fā),闡明程序性細(xì)胞死亡因子4(Programmed Cell Death,PDCD4)誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,并進(jìn)一步探討對(duì)5-FU抗腫瘤作用的影響,為聯(lián)合應(yīng)用基因治療和化學(xué)療法治療胰腺癌,提供新的思路和方法。 研究方法: 1.應(yīng)用免疫組化S-P法和Western blotting法分別檢測(cè)69例人胰腺癌石蠟組織切片和8例冷凍保存的新鮮胰腺癌組織中PDCD4的表達(dá)水平,探討其與腫瘤的

2、分化程度、病理分期等臨床病理參數(shù)的關(guān)系。 2.應(yīng)用人胰腺癌細(xì)胞系PANC-1,轉(zhuǎn)染PDCD4表達(dá)質(zhì)粒p<'EGFP-N1>/PDCD4及空載體質(zhì)粒p<'EGFP-N2>,提取細(xì)胞質(zhì)蛋白,應(yīng)用Westem blotting法檢測(cè)PDCD4和細(xì)胞色素C(Cyt.C)表達(dá)。同時(shí)行DNAladder凝膠電泳分析,進(jìn)行凋亡檢測(cè)。 3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,依次加入不同濃度的5-氟尿嘧啶(5-FU),應(yīng)用MTT法進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)抑制

3、實(shí)驗(yàn),計(jì)算細(xì)胞存活率。同時(shí)應(yīng)用Hoechest 33342熒光染料染色,用熒光顯微鏡觀察,進(jìn)行凋亡計(jì)數(shù)。再提取細(xì)胞質(zhì)蛋白,應(yīng)用Western blotting法檢測(cè)細(xì)胞色素C(Cyt.C)表達(dá)水平。 研究結(jié)果: 1.estem印跡分析:Western印跡檢測(cè)8例配對(duì)胰腺癌及癌旁正常胰腺組織的PDCD4蛋白表達(dá)情況結(jié)果顯示,同癌旁正常胰腺組織相比,所有胰腺癌組織PDCD4蛋白表達(dá)均明顯減弱或缺失。 2.免疫組織化學(xué)

4、染色:在正常胰腺組織中,陽(yáng)性細(xì)胞比例均在80%以上。在69例胰腺癌組織中,PDCD4表達(dá)明顯下降,且表達(dá)水平出現(xiàn)明顯差異。在不同分化程度胰腺癌組織之間PDCD4表達(dá)存在明顯差異,隨著分化程度下降,表達(dá)明顯下調(diào)。 3.Westem blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞PDCD4和Cyt.C水平,結(jié)果示與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染組表達(dá)明顯增高。 4.DNA ladder凝膠電泳分析,轉(zhuǎn)染組見(jiàn)典型的凋亡梯形帶,說(shuō)明出現(xiàn)細(xì)胞凋亡。 5.

5、MTT法結(jié)果顯示,隨著5-FU濃度升高,PANC-1活細(xì)胞比率下降。與對(duì)照組相比,在相同濃度的5-FU作用下,轉(zhuǎn)染組活細(xì)胞比率明顯下降,出現(xiàn)明顯的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。 6.凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示,隨著5-FU濃度升高,PANC-1凋亡細(xì)胞比率增高。與對(duì)照組相比,在相同濃度的5-FU作用下,轉(zhuǎn)染組凋亡細(xì)胞比率明顯增高。 7.Westem blotting檢測(cè)相同濃度作用下的5-Fu,轉(zhuǎn)染組細(xì)胞質(zhì)蛋白的Cyt.C表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組。

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