鵝源新城疫病毒自然弱毒株的分離、鑒定與免疫效果觀察.pdf

1、新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起禽類的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病，被國(guó)際獸疫局列為A類動(dòng)物傳染病。到目前為止，世界范圍內(nèi)已發(fā)生過(guò)四次ND大流行，給各地養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展造成了嚴(yán)重?fù)p失。作為NDV自然貯存庫(kù)的水禽，曾一度被認(rèn)為對(duì)該病毒具有很強(qiáng)的抵抗力，感染后不表現(xiàn)任何臨床癥狀，即使感染強(qiáng)毒也不發(fā)病。但1997年以來(lái)，我國(guó)華東和華南地區(qū)先后發(fā)現(xiàn)了一種以侵害鵝的消化道和免疫器官為主要特征的傳染病，該病已在我國(guó)大部分地區(qū)呈流行趨勢(shì)，嚴(yán)重

2、影響了我國(guó)養(yǎng)鵝業(yè)的健康發(fā)展。目前已證實(shí)，該病的病原為新城疫病毒，其基因型以F基因Ⅶ型為主。 理論上講，NDV只有一個(gè)血清型，經(jīng)典ND疫苗(Ⅰ系、Ⅳ系等)的預(yù)防接種完全能夠抵抗病毒的感染。然而，用作種毒的特定疫苗毒株，經(jīng)過(guò)反復(fù)傳代或長(zhǎng)期使用，可能會(huì)出現(xiàn)毒力增強(qiáng)或免疫原性減弱等問(wèn)題，從而使疫苗的保護(hù)力減弱，增加了疾病防制的難度。免疫失敗導(dǎo)致的非典型ND的發(fā)生，對(duì)鵝致病的NDV強(qiáng)毒株的出現(xiàn)，不同基因型NDV的共同存在，這些問(wèn)題的出現(xiàn)與

3、臨床上長(zhǎng)期、大量地使用活疫苗所造成的免疫壓力有關(guān)。因此，篩選免疫原性較好的NDV弱毒株作為疫苗侯選株，從流行病學(xué)和免疫學(xué)的角度來(lái)說(shuō)，均具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。 筆者于江蘇省某健康鵝群篩選到一株NDV，通過(guò)雞胚接種和血清學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行分離、鑒定，結(jié)果表明該毒株具有血凝活性，且該活性能被抗NDV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清所抑制。應(yīng)用電鏡技術(shù)、生物學(xué)特性檢測(cè)等方法對(duì)該毒株進(jìn)行鑒定，電鏡下可見(jiàn)大量呈多形性的NDV病毒粒子，表面有囊膜。該毒株的MLD=10<'

4、-5>/0.1ml，MDT=148.8h，ICPI=0.375，參照新城疫的毒力判定標(biāo)準(zhǔn)，確定該分離株為NDV弱毒株，命名為G0405。 應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對(duì)G0405毒株的F基因進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)鑒定后進(jìn)行克隆、測(cè)序，利用基因分析軟件對(duì)測(cè)定的F基因核苷酸序列及由其推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行分析，并繪制遺傳發(fā)育進(jìn)化樹。結(jié)果表明，G0405為F基因I型弱毒株，其F蛋白裂解位點(diǎn)的序列為<'112>G-K-Q-G-R-L<'117>，符

5、合NDV弱毒株的序列特征，與NDV經(jīng)典的毒力測(cè)定方法 (MDT、ICPI)判定結(jié)果相一致。將G0405與國(guó)內(nèi)外部分NDV強(qiáng)、弱毒株的F基因編碼區(qū)1 654bp核苷酸序列與其推導(dǎo)的F蛋白N-末端551個(gè)氨基酸序列的同源性進(jìn)行比較，結(jié)果表明G0405與其它NDV毒株的F基因核苷酸序列的同源性在87.8％～96.1％之間，氨基酸序列的同源性在89.5％～98.4％之間。通過(guò)免疫原性測(cè)定、同群飼養(yǎng)擴(kuò)散試驗(yàn)、不同胚源擴(kuò)增后對(duì)雛鵝的免疫對(duì)比試驗(yàn)、與

6、Lasota和V4疫苗株的免疫效力比較試驗(yàn)、攻毒保護(hù)試驗(yàn)等，對(duì)G0405的免疫效果進(jìn)行觀察研究。結(jié)果表明，G0405具有較好的免疫原性，能刺激鵝群產(chǎn)生較高的抗體水平。免疫后第5d開(kāi)始產(chǎn)生抗體，并呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，12d后抗體水平達(dá)到最高值(7.2Log2)。水平擴(kuò)散能力較強(qiáng)，能夠產(chǎn)生整齊的抗體滴度，利于進(jìn)行免疫監(jiān)測(cè)和免疫程序的制定。病毒在鵝胚與雞胚內(nèi)進(jìn)行增殖后免疫鵝群，前者能夠產(chǎn)生相對(duì)較好的抗體水平。G0405免疫效果略高于V4，但低于La