BMSCs移植聯(lián)合電針刺激對腦出血大鼠GAP-43和Syp表達的影響.pdf

1、目的:研究電針刺激聯(lián)合BMSCs移植對腦出血(ICH)大鼠尾殼核及其附近出血區(qū)GAP-43和Syp表達的的影響。
　　方法:將GFP標記的BMSCs常規(guī)復蘇、傳代,經(jīng)誘導培養(yǎng)6小時后收集細胞,調(diào)整細胞濃度至2.5×107個/ml備用。采用膠原酶加肝素誘導法在SD大鼠腦尾殼核附近注射膠原酶和肝素以構建ICH模型。分別于模型構建后2小時、24小時和48小時進行神經(jīng)損害程度評分(NSS評分),選大于9分者行下一步實驗。在模型構建后3天分

2、別注入生理鹽水20μl、BMSCs20μl和BMSCs20μl2小時后輔以電針刺激大鼠百會穴和大椎穴,建立實驗對照組(NS組)、BMSCs移植組(BMSCs組)和BMSCs移植聯(lián)合電針組(Ea-BMSCs組),各組又以治療時間的不同分為移植后1天、3天、5天、7天和14天5個亞組,于上述時間點對大鼠NSS評分后處死大鼠取材備用。分別采用Western blot和RT-PCR法檢測尾殼核區(qū)GAP-43和Syp蛋白及mRNA在不同組別各個時

3、間點的表達變化。
　　結果:(1)NSS評分。移植前評分:在大鼠ICH建模后移植前,同一時間點不同組別即Ea-BMSCs組、BMSCs組和NS組三組間 NSS評分基本一致,無顯著性差異(P>0.05)。移植后評分:Ea-BMSCs組在3天、5天、7天、14天與NS組比較NSS評分顯著下降(P<0.05);BMSCs組5天與NS組比較NSS評分明顯下降(P<0.05);Ea-BMSCs組在5、7和14天與BMSCs組比較NSS評分下

4、降(P<0.05)。(2)Western blot定量檢測GAP-43和Syp蛋白表達。三組在移植后1天GAP-43少量表達,而Syp在1天未見明顯表達,3天后才可見少量表達。三組各時間點組內(nèi)比較:Ea-BMSCs組GAP-43在3天、5天、7天、14天表達逐漸增強,Syp于5天、7天、14天表達增強,兩種標記表達在7-14天最強(P<0.05);BMSCs組GAP-43在3天、5天和7天表達逐漸增強,7天出現(xiàn)高峰(P<0.05),以后

5、減弱,Syp于5天、7天、14天表達增強,在7-14天較強;NS組GAP-43在3天、5天和7天表達逐漸增強,7天較強,隨后減弱,而Syp于5天和7天可見表達,14天未見明顯表達。三組組間比較:于5天、7天和14天Ea-BMSCs組與 NS組比較 GAP-43和Syp表達顯著增強(P<0.05), Ea-BMSCs組在7天和14天與 BMSCs組比較 GAP-43表達顯著增強(P<0.05),而Syp表達在14天較BMSCs組增強(P<

6、0.05)。(3)RT-PCR半定量檢測GAP-43和Syp mRNA水平。三組在移植后1天GAP-43 mRNA水平即可升高,而Syp mRNA水平較低,3天后Syp mRNA水平升高。三組各時間點組內(nèi)比較:Ea-BMSCs組GAP-43于3天、5天、7天、14天mRNA水平逐漸升高,Syp于5天、7天、14天mRNA水平較高,兩種mRNA水平在7-14天最高(P<0.05);BMSCs組GAP-43 mRNA水平在3天、5天和7天升

7、高,尤以7天為甚(P<0.05),隨后開始下降,Syp mRNA于5天、7天、14天表達較高,于7-14天更高;NS組GAP-43 mRNA水平在3天、5天和7天表達逐漸升高,7天較高,然后下降, Syp于5天和7天可見mRNA表達,14天無顯著表達。三組組間比較:在5天、7天和14天Ea-BMSCs組與NS組比較GAP-43和Syp mRNA表達水平顯著升高(P<0.05),Ea-BMSCs組在5天、7天和14天與BMSCs組比較GA

8、P-43 mRNA表達明顯升高(P<0.05),Syp mRNA在14天較 BMSCs組升高(P<0.05)。
　　結論:(1) BMSCs移植聯(lián)合電針刺激治療實驗性ICH大鼠較單純BMSCs移植更能提高出血灶及其周邊區(qū)GAP-43的表達,促進軸突生長;(2)BMSCs移植聯(lián)合電針刺激治療實驗性 ICH大鼠較單純 BMSCs移植能明顯增強 Syp的表達,加速突觸再生;(3)電針刺激聯(lián)合 BMSCs移植治療大鼠ICH的作用機制可能是