腦缺血再灌注大鼠GAP-43和RhoA蛋白表達(dá)及NEP1-40對(duì)其影響.pdf

1、目的：成年哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，機(jī)體的功能恢復(fù)受到限制，這種功能恢復(fù)的限制主要是由于神經(jīng)軸突再生受限。因此，研究神經(jīng)軸突再生通路的可塑性及其調(diào)節(jié)機(jī)制是研究腦缺血再灌注損傷后肢體癱瘓康復(fù)機(jī)制的核心問(wèn)題。在脊髓損傷模型中，鞘內(nèi)注射NgR的競(jìng)爭(zhēng)性肽段（Nogo extra cellular peptide residues1-40，NEP1-40）可引起皮質(zhì)脊髓束（corticospinal tract，CST）的顯著芽生和功能改善。N

2、EP1-40用于腦缺血再灌注損傷患者是否同樣有效尚不清楚。本文應(yīng)用蛋白免疫印跡（Western blot，WB）方法檢測(cè)大腦中動(dòng)脈缺血再灌注（middle cerebral artery ischemia-reperfusion，MCAI/R）模型大鼠缺血灶周邊腦組織生長(zhǎng)相關(guān)蛋白（Growth-associated protein，GAP-43）和RhoA蛋白表達(dá)，結(jié)合Montoya設(shè)計(jì)的“樓梯測(cè)試”方法對(duì)患肢運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行測(cè)試，研究NE

3、P1-40側(cè)腦室注射對(duì)MCAI/R模型大鼠的軸突再生、患肢功能恢復(fù)和RhoA信號(hào)通路活動(dòng)的影響，探討其可能的機(jī)制。 方法：（1）采用成年SD雄性大鼠，經(jīng)“樓梯測(cè)試”訓(xùn)練后，選擇60只左利爪的大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、缺血對(duì)照組、側(cè)腦室注射PBS組和側(cè)腦室注射NEP1-40組四組，并在MCAI/R造模前1d和造模后7d、14d和21d分別進(jìn)行左前肢功能測(cè)試。（2）假手術(shù)組僅做頸外動(dòng)脈結(jié)扎即縫合皮膚，不做進(jìn)一步的處理。缺血對(duì)照組、側(cè)腦室

4、注射PBS組和側(cè)腦室注射NEP1-40組大鼠均采用線栓法制作MCAI/R模型。（3）在MCAI/R造模成功后的24h，分別對(duì)PBS組和NEP1-40組大鼠進(jìn)行側(cè)腦室注射。（4）用wester blot方法分別在造模后7d、14d、21d檢測(cè)各組大鼠缺血灶周邊腦組織GAP-43和RhoA蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：（1）缺血對(duì)照組大鼠缺血灶周邊腦組織GAP-43蛋白的表達(dá)在造模術(shù)后7d最高，14d開(kāi)始降低但仍高于假手術(shù)組大鼠（P<0.05

5、），21d降低至接近假手術(shù)組水平（P>0.05）。（2）側(cè)腦室注射NEP1-40組大鼠缺血灶周邊腦組織GAP-43蛋白的表達(dá)在造模術(shù)后7d和14d均高于缺血對(duì)照組和側(cè)腦室注射PBS組大鼠（P<0.05），其中7d最顯著。（3）缺血對(duì)照組大鼠缺血灶周邊腦組織RhoA蛋白表達(dá)在造模術(shù)后7d最高，14d開(kāi)始降低，21d最低，但21d仍高于假手術(shù)組大鼠（P<0.05）。（4）側(cè)腦室注射NEP1-40組大鼠缺血灶周邊腦組織RhoA蛋白在術(shù)后各時(shí)相

6、點(diǎn)均顯著低于缺血對(duì)照組和側(cè)腦室注射PBS組大鼠（P<0.05）。（5）各組大鼠在MCAI/R造模術(shù)前1d左前肢抓取能力比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。缺血對(duì)照組大鼠，側(cè)腦室注射PBS組大鼠和側(cè)腦室注射NEP1-40組大鼠在造模術(shù)后各時(shí)相點(diǎn)“樓梯測(cè)試”結(jié)果呈相同變化趨勢(shì)；側(cè)腦室注射NEP1-40大鼠在造模術(shù)后各時(shí)相點(diǎn)“樓梯測(cè)試”結(jié)果均顯著高于缺血對(duì)照組和側(cè)腦室注射PBS組大鼠（P<0.05）。 結(jié)論：（1）缺血性腦損傷急性期和恢

7、復(fù)期GAP-43和RhoA蛋白表達(dá)同步上調(diào)。（2）NEP1-40側(cè)腦室注射能促進(jìn)GAP-43蛋白表達(dá)同時(shí)抑制RhoA蛋白表達(dá)。（3）NEP1-40側(cè)腦室注射能促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后軸突的再生和運(yùn)動(dòng)功能改善。（4）這些研究發(fā)現(xiàn)提示NEP1-40可通過(guò)促進(jìn)GAP-43蛋白的表達(dá)，同時(shí)抑制RhoA蛋白的表達(dá)，最終促進(jìn)腦缺血再灌注大鼠損傷后神經(jīng)軸突的再生和患肢功能的恢復(fù)，顯示出其對(duì)腦梗死的治療潛力。NEP1-40促進(jìn)神經(jīng)軸突的再生和運(yùn)動(dòng)功能康復(fù)