褪黑素對(duì)大鼠脊髓損傷GAP-43、BDNF表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的:
　　 脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)是一種嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)創(chuàng)傷性疾病，可導(dǎo)致患者出現(xiàn)嚴(yán)重的運(yùn)動(dòng)及感覺功能障礙。其修復(fù)一直是困擾人類健康的難題，治療并促進(jìn)SCI康復(fù)的方法主要是靠藥物治療和外科手術(shù)治療，但均未取得令人滿意的療效。脊髓損傷的重要問題是上、下行傳導(dǎo)神經(jīng)纖維束的斷裂，導(dǎo)致神經(jīng)通路的中斷。因此修復(fù)的主要問題表現(xiàn)在近段軸突能不能向下延展生長(zhǎng)并形成功能型連接。褪黑素是由松果體產(chǎn)生的一種

2、胺類激素，研究表明其可通過清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)、減輕細(xì)胞損傷和凋亡、減輕中性粒細(xì)胞介導(dǎo)的毒性損害等機(jī)制修復(fù)脊髓損傷，但其是否可通過提高GAP-43、BDNF的含量以修復(fù)脊髓損傷目前尚少見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在通過檢測(cè)血清中GAP-43、BDNF的含量和脊髓中GAP-43、BDNF的表達(dá)，進(jìn)一步明確褪黑素治療脊髓損傷的機(jī)制，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 90只SD大鼠隨機(jī)分為3組:褪黑素治療組（A

3、組，n=30）、脊髓損傷組(B組，n=30)、假手術(shù)組（C組，n=30）。A、B兩組以改良Allen's法（打擊量50gcf）建立T11-T12水平損傷模型。A組于術(shù)后10 min按體重腹腔注射褪黑素100mg/kg，B組則按體重腹腔注射等體積的5％無(wú)水乙醇（MT的溶劑），C組只切除T11-T12棘突及椎板而不損傷脊髓。分別于術(shù)后1、3、7d對(duì)各組大鼠進(jìn)行BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分，取血液檢測(cè)BDNF、GAP-43含量，應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)損

4、傷段脊髓BDNF mRNA及GAP-43 mRNA的表達(dá)水平，并應(yīng)用免疫組化法觀察脊髓中BDNF、GAP-43的表達(dá)特點(diǎn)，應(yīng)用HE染色法觀察其一般病理變化。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以x±s表示計(jì)量資料，多組間比較采用單因素方差分析(ANOVA)，各組方差具有齊性時(shí)，組間比較采用t(LSD-t)檢驗(yàn)，各組方差不齊時(shí)，采用Tamhane's T2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:

5、　　 1.術(shù)后1、3、7d大鼠血清中BDNF、GAP-43含量及脊髓內(nèi)BDNF、GAP-43mRNA表達(dá)水平各組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中褪黑素組最高，脊髓損傷組次之，假手術(shù)組最低。
　　 2.A、B兩組大鼠于術(shù)后均出現(xiàn)了嚴(yán)重的下肢神經(jīng)功能障礙，兩組的BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分較C組明顯降低，差異均顯著(P＜0.05);A、B兩組比較，在損傷后第1、3天其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），兩組大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能無(wú)明顯恢復(fù)

6、，但在損傷后第7天，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3.免疫熒光組織化學(xué)染色結(jié)果表明:褪黑素組脊髓切片中BDNF、GAP-43染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)最多，脊髓損傷組次之，假手術(shù)組最低，各組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.褪黑素治療后可改變脊髓損傷區(qū)局部的微環(huán)境，并通過上調(diào)BDNF、GAP-43mRNA的表達(dá)修復(fù)脊髓損傷。
　　 2.病理學(xué)觀察表明褪黑素可降低大鼠脊髓損