高血壓局部腎素血管緊張素系統(tǒng)與炎癥因子的關(guān)系雌性激素的影響.pdf

1、目的：在高血壓病的發(fā)生發(fā)展過程中，嚴(yán)重的器官損傷可導(dǎo)致致命性的并發(fā)癥。因此，逆轉(zhuǎn)或減少靶器官損傷，防止并發(fā)癥的發(fā)生是非常必要的。腎素血管緊張素系統(tǒng)和炎癥在高血壓靶器官損傷中可能扮演著重要的角色。女性激素可影響血壓水平，對心血管系統(tǒng)具有一定的保護(hù)作用。本課題旨在研究性別對高血壓局部RAS與炎癥因子作用的影響。
　　 方法與結(jié)果：
　　 1．局部RAS、炎癥與自發(fā)性高血壓大鼠器官損傷
　　 應(yīng)用清醒自由活動大鼠血流動

2、力學(xué)測定系統(tǒng)對WKY和SHR大鼠的血壓、血壓波動性進(jìn)行監(jiān)測，隨后應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對局部組織中的TNF-α、IL-1β、IL-6及renin、ACE、ACE2、AT1、AT2進(jìn)行檢測，研究SHR心臟和主動脈中RAS各組分的基因表達(dá)；局部組織RAS的各種組分的基因表達(dá)與心血管肥大之間的關(guān)系；局部炎癥因子對血管肥大的作用，以及其與局部RAS成分之間的關(guān)系。
　　 1.1 血流動力學(xué)變化、血漿AngⅡ的濃度、血清炎癥因子的濃度及器官

3、損傷
　　 與WKY大鼠相比，在SHR中SBP、DBP及BPV明顯增高，HP、HPV及BRS明顯降低；血漿中AngⅡ的含量明顯增高，血清IL-1β、IL-6的含量明顯增高，SHR大鼠的器官損傷特點比較明顯，主要表現(xiàn)在LVW/BW和AW/length明顯增加。
　　 1.2 RAS、炎癥因子的mRNA在SHR心臟和主動脈中的表達(dá)
　　 與WKY大鼠相比，SHR心臟中血管緊張素原、腎素、ACE2、AT1和AT2的mR

4、NA表達(dá)分別增加了314%、212%、119%、215%和250%；WKY和SHR在心臟中ACE mRNA的表達(dá)無顯著差異；SHR主動脈中ACE、ACE2、AT1和AT2的mRNA表達(dá)分別增加了116%、86%、107%和110%，WKY和SHR主動脈中血管緊張素原和腎素的mRNA表達(dá)無顯著差異。
　　 與WKY大鼠相比，SHR心臟中TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)分別增加了213%、132%和91%；與WKY大鼠

5、相比，SHR主動脈中TNF-α和IL-6的mRNA表達(dá)分別增加了220%和458%，WKY和SHR主動脈中IL-1β的mRNA表達(dá)無顯著差異。
　　 1.3 SHR血漿中AngⅡ濃度和血流動力學(xué)參數(shù)與心臟和主動脈血管肥大的關(guān)系
　　 BP和BPV與LVW/BW和AW/length之間呈顯著正相關(guān)；而BRS與心血管肥大呈顯著負(fù)相關(guān)。SHR血漿中AngⅡ濃度與LVW/BW和AW/length無顯著相關(guān)。
　　 1.4

6、 SHR局部組織的RAS和炎癥因子mRNA的表達(dá)與心臟血管肥大的關(guān)系
　　 SHR心臟中ACE、ACE2和TNF-α的mRNA表達(dá)與LVW/BW之間呈顯著正相關(guān)；而在主動脈中，血管緊張素原、ACE2、TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表達(dá)與AW/length之間呈顯著正相關(guān)。
　　 1.5 SHR局部組織中RAS的mRNA表達(dá)與炎癥因子mRNA表達(dá)之間的關(guān)系
　　 SHR心臟中TNF-α的mRNA與腎素、

7、AT1和AT2的mRNA表達(dá)之間呈顯著正相關(guān)；主動脈中ACE2和AT2的mRNA表達(dá)與TNF-α的mRNA表達(dá)之間呈顯著正相關(guān)。
　　 SHR心臟中血管緊張素原、腎素、ACE、ACE2和AT2的mRNA表達(dá)與IL-6的mRNA表達(dá)之間呈顯著正相關(guān)；主動脈中血管緊張素原、腎素、ACE2、AT1和AT2的mRNA表達(dá)與IL-6的mRNA表達(dá)之間呈顯著正相關(guān)。
　　 1.6 多元逐步回歸分析
　　 DBP在LW/BW中

8、的β=0.493，P＜0.01，ACE基因表達(dá)的β=0.449，P＜0.01。AW/length與BRS獨立相關(guān)，β=?0.810，P＜0.01。決定心血管損傷的平均共系數(shù)是0.596。這表明血流動力學(xué)因子、DBP、BRS以及ACE mRNA 在高血壓誘導(dǎo)的心血管肥大占59.6%的變異。
　　 2．性別對自發(fā)性高血壓大鼠炎癥反應(yīng)的作用研究
　　 采用6月齡和12月齡的SHR，用無創(chuàng)尾動脈測壓系統(tǒng)測定血壓；麻醉后頸動脈插管

9、取血樣本，隨后取器官樣本，用放免法測定血漿AngⅡ、ET-1濃度，血清E2、TNF-α、IL-6和IL-1β濃度；大體觀察靶器官損傷；應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測腎臟組織中的TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA。
　　 2.1 性別對SHR的收縮壓及靶器官損傷的影響
　　 雄性SHR的SBP和體重明顯高于同齡的雌性SHR，同性別的SHR隨著年齡的增加，SBP和體重明顯增加。同齡雌性SHR的VW/BW、LVW/BW和RV

10、W/BW明顯大于雄性組；同性別的雌性SHR隨著年齡的增加，心室指數(shù)增大，同性別的雄性SHR隨著年齡的增加，右心室指數(shù)增大。雄性SHR的LVW/RVW比值明顯大于雌性，同性別的SHR隨著年齡的增加，LVW/RVW增加。雄性SHRAW/length明顯大于同齡雌性；同性別的SHR隨著年齡的增加，AW/length增大。腎指數(shù)RKW/BW的性別二重性僅存在于12mSHR中，隨著隨著年齡的增加腎臟損傷加重。
　　 2.2 SHR的Ang

11、Ⅱ、ET、E2 及炎癥因子的性別差異
　　 在同齡異性SHR中，雄性組血漿AngⅡ的含量明顯大于雌性組；雌性組血漿ET-1的量明顯大于雄性組；均無年齡因素的影響。血清IL-1b：SHR-6m組明顯高于同齡雄性組，雄性SHR-12m組明顯高于同齡雌性組，SHR-12m組明顯高于SHR-6m組。血清IL-6：雄性SHR組明顯高于同齡的雌性組，SHR-12m組明顯高于SHR-6m組。血清TNFa：SHR-6m不存在性別差異，雄性SHR

12、-12m組明顯高于同齡的雌性組；SHR-12m組明顯高于SHR-6m組。
　　 2.3 6月齡SHR的AngⅡ、ET與E2 及炎癥因子的相關(guān)性
　　 SHR血漿AngⅡ與血清炎癥因子IL-1b及IL-6之間呈正相關(guān)，而與TNF-a之間沒有相關(guān)性；ET與各炎癥因子之間沒有相關(guān)性。雌性SHR血漿AngⅡ與血清E2 之間呈正相關(guān)。
　　 2.4 SHR腎組織中炎癥因子mRNA表達(dá)
　　 腎組織中IL-6 mRN

13、A的表達(dá)：雌性SHR-6m組明顯低于同齡雄性組（6m：53%，12m：272%）SHR-12m組明顯高于同性別SHR-6m組（雌性：69%，雄性：242%）。IL-1b的mRNA的表達(dá)：SHR-12m組高于同性別SHR-6m組（雌性：25%，雄性：33%）。TNFa的mRNA的表達(dá)：雌性SHR-6m和SHR-12m明顯低于同齡雄性（6m：54%，12m：50%），無年齡因素的影響。
　　 3．性別對腎血管性高血壓大鼠發(fā)生發(fā)展的影

14、響
　　 采用10周齡SD大鼠鉗夾一側(cè)腎動脈血管制備腎血管性高血壓（2K1C），摘除一組雌性大鼠雙側(cè)卵巢（VOX）造成雌激素水平低下，再鉗夾一側(cè)腎動血管脈制備腎血管性高血壓。常規(guī)飼養(yǎng)6個月，麻醉下股動脈插管測血壓后，取血及器官。用ELISA法測定各組大鼠血漿中AngⅡ和ET-1的濃度，血清中炎癥因子的濃度。觀察靶器官損傷。應(yīng)用Western Blot方法，檢測各組大鼠胸主動脈、心臟和腎臟的組織中ACE、ACE2、AT1和AT2蛋

15、白質(zhì)表達(dá)。
　　 3.1 2K1C大鼠血流動力學(xué)參數(shù)的測定
　　 與2K1C-sham-雄性組比較，各2K1C手術(shù)組SBP、DBP顯著性增高，而HP在2K1C-雌性組顯著性降低，與2K1C-雄性組比較，2K1C-雌性組SBP、DBP顯著性增高，2K1C-OVX組無差別，兩組數(shù)據(jù)基本接近；與2K1C-雌性組比較，2K1C-OVX組SBP、DBP明顯降低。
　　 3.2 2K1C大鼠靶器官的測定
　　 與2K

16、1C-sham-雄性組比較，VW/BW、LVW/BW、LVW/BW和RKW/BW均顯著性增加；2K1C-雌性組的各項指標(biāo)均明顯高于2K1C-雄性組和2K1C-OVX組；AW/length僅在2K1C-雄性組顯著升高，而在其他各組則無變化。
　　 3.3 2K1C大鼠血漿AngII、ET-1和血清炎癥因子濃度的測定
　　 血漿AngII：僅在2K1C-雄性組明顯升高，而在其他各組均無差異。血漿ET-1：2K1C手術(shù)各組明顯

17、高于假手術(shù)組，并且2K1C-雌性組明顯高于2K1C-雄性組和 2K1C-OVX組。血清IL-1b：2K1C-OVX組升高，而2K1C-雌性組則是下降，其下降程度與2K1C-雄性組相比有顯著性差異。血清IL-6：2K1C-OVX組減少，其他各組均無顯著性變化；與2K1C-雌性組比較，2K1C-OVX組血清IL-6的濃度也明顯減少。血清TNF-a：2K1C手術(shù)組明顯升高；2K1C-OVX組升高作用最為明顯。
　　 3.4 2K1C大

18、鼠組織中RAS蛋白表達(dá)的測定
　　 血管組織RAS蛋白表達(dá)：與2K1C-sham-雄性組比較，ACE的蛋白表達(dá)2K1C-雄性組和2K1C-雌性組明顯升高，2K1C-OVX組無變化，與2K1C-雄性組比較，2K1C-雌性組明顯升高；ACE2 蛋白表達(dá)2K1C-OVX組和2K1C-雌性組明顯升高，2K1C-雄性組無變化；與2K1C-sham-雄性組比較，AT1受體的蛋白表達(dá)無差異，與2K1C-雄性組比較，2K1C-雌性組和2K1C-

19、OVX組明顯減少；AT2受體的蛋白表達(dá)各手術(shù)組明顯增加，2K1C-雌性組增加最為明顯。腎臟組織RAS蛋白表達(dá)：與2K1C-sham-雄性組比較，ACE蛋白的表達(dá)2K1C-雌性組明顯升高；ACE2 蛋白的表達(dá)各組間無統(tǒng)計學(xué)差異；AT1受體的蛋白表達(dá)2K1C-雌性組明顯減少；AT2受體的蛋白表達(dá)2K1C-雄性組和2K1C-OVX組無統(tǒng)計學(xué)差異，2K1C-雌性組明顯減少。心臟組織RAS蛋白表達(dá)：與2K1C-sham-雄性組比較，ACE蛋白的表

20、達(dá)2K1C-雌性組升高；ACE2 蛋白的表達(dá)2K1C-雄性組和2K1C-雌性組明顯下降，兩組間無差異；AT1受體的蛋白表達(dá)2K1C-雄性組和2K1C-雌性組增加，2K1C-雌性組與其他各組相比，AT1受體的蛋白表達(dá)明顯增加。AT2受體的蛋白表2K1C-OVX組降低。
　　 結(jié)論：
　　 1．與血壓正常的對照組比較，自發(fā)性高血壓大鼠組的心臟和主動脈中RAS所有組分和炎性細(xì)胞因子的基因表達(dá)增加；左心室肥厚與心臟局部RAS的A

21、CE和ACE2基因，TNF-a基因表達(dá)正相關(guān)相關(guān)；主動脈肥厚與主動脈局部RAS血管緊張素和ACE2基因，炎性細(xì)胞因子TNF-a、IL-1b和IL-6的基因表達(dá)呈正相關(guān)。ACE2和AT2在RAS中可能并沒有起主要作用，但可部分對抗ACE和AT1在高血壓靶器官損傷的作用。
　　 2．雌激素對成年（6月齡）自發(fā)性高血壓大鼠的血壓水平和靶器官的損傷有一定的緩解作用；雌性成年組自發(fā)性高血壓大鼠血漿AngII明顯低于同齡雄性組，ET-1明顯

22、高于同齡雄性組；血清中IL-6的濃度和腎組織中的mRNA表達(dá)顯著低于同齡雄性組，并隨著年齡的增長而增加；雌性老年組血清TNF-a的濃度，雌性成年組和老年組自發(fā)性高血壓大鼠腎組織中TNF-a mRNA 表達(dá)水平明顯低于同齡雄性組；線性回歸分析表明，IL-1b和IL-6均與Ang II呈顯著正相關(guān)；雌二醇與Ang II呈顯著正相關(guān)。
　　 3． SD大鼠一側(cè)腎動脈血管鉗夾后，形成腎血管性高血壓（2K1C）。2K1C雌性大鼠血壓水平，