新生兒科病房產ESBLs分離株基因分型的研究.pdf

1、【目的】為了解廣東省婦幼保健院新生兒科病房產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的流行情況、基因型特點及其耐藥性，對50株來自新生兒科病房的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的ESBLs進行檢測，對產酶株進行TEM、SHV和CTX-M基因分型，并檢測其對9種抗生素的最低抑菌濃度(MIC)。 【方法】 1．收集廣東省婦幼保健院2005年1月至12月大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌臨床分離菌株50株，其中大腸埃希菌12株，肺炎克雷伯菌38株；

2、 2．采用美國國家臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦的ESBLs表型確證試驗(紙片擴散法)篩選產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌共22株，其中大腸埃希菌5株，肺炎克雷伯菌17株； 3．應用傳統(tǒng)堿裂解法提取產ESBLs菌的質粒DNA； 4．以菌株的質粒DNA為模板，應用PCR法分別擴增22株產ESBLs菌株的TEM、SHV和CTX-M基因； 5．應用ABI 377自動熒光DNA測序儀對所有陽性的PCR

3、產物進行雙向DNA測序；并進行序列拼接、檢索及基因分型； 6．應用瓊脂稀釋法檢測9種抗生素對所有22株產ESBLs菌株的最低抑菌濃度(MIC)，檢測的抗生素包括亞胺培南、頭孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢噻肟、環(huán)丙沙星、頭孢西丁、阿米卡星、頭孢他啶、氨曲南。 【結果】 1．ESBLs的檢出率：50株細菌中，檢出ESBLs陽性菌22株，檢出率為44％，其中大腸埃希菌5株，肺炎克雷伯菌17株； 2．產ESBL

4、s菌株的標本分布：22株ESBLs陽性株分別來自呼吸道分泌物(12株)、血液(6株)和臍分泌物(4株)； 3．大腸埃希菌基因分型結果：5株大腸埃希菌中，3株同時檢出CTX-M-14和TEM-1，1株檢出CTX-M-14，1株三種基因均未檢出； 4．肺炎克雷伯菌基因分型結果：17株肺炎克雷伯菌中7株同時檢出CTX-M-14型和SHV-12，9株只檢出SHV-12，1株只檢出CTX-M-14：@5．MIC檢測結果：亞胺培南的

5、抗菌活性最高，敏感率為100％，MIC<,50>和MIC<,90>分別為0.25μg/ml和0.5μg/ml；其次為頭孢吡肟，敏感率為95.5％，MIC<,50>和MIC<,90>分別為2μg/ml和4μg/ml；環(huán)丙沙星的抗菌活性也較高，敏感率為90.9％，MIC<,50>和MIC<,90>分別為0．125μg/ml和1 μg/ml；哌拉西林/他唑巴坦的敏感率為86.4％，MIC<,50>和MIC<,90>分別為4μg/ml和32 μ

6、g/ml：頭孢西丁和阿米卡星的敏感率分別為68.2％和63.6％；頭孢噻肟、頭孢他啶和氨曲南的敏感率則不足40％，分別為36.4％、27.3％和27.3％。 【結論】 1．廣東省婦幼保健院新生兒科病房大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs的檢出率較高，為44％； 2．SHV-12型ESBls是廣東省婦幼保健院新生兒科病房最常見的ESBLs，其次為CTX-M-14： 3．產ESBLs菌對亞胺培南100％敏感，