耐甲氧西林金黃色葡萄球菌耐藥性檢測和同源性分析.pdf

1、目的：通過了解長治醫(yī)學(xué)院附屬和平醫(yī)院(以下簡稱“和平醫(yī)院”)近三年(2007～2009)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的檢出率、耐藥率的變化及臨床分布情況，提高臨床對(duì)院內(nèi)感染MRSA菌株的認(rèn)識(shí)，為臨床科學(xué)合理的選用抗菌藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)；通過對(duì)收集菌株進(jìn)行同源性分析，為控制耐藥菌株的感染和暴發(fā)流行提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：(1)收集和平醫(yī)院2007年1月至2009年12月份檢驗(yàn)科微生物室收檢各種臨床標(biāo)本中檢出的金黃色葡萄球

2、菌菌株(同一患者多次分離到的菌株僅分析第一次細(xì)菌)，回顧性分析其臨床資料，用K-B法檢測金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素(P)、克林霉素(DA)、紅霉素(E)、氯霉素(C)、阿奇霉素(AZM)、慶大霉素(CN)、環(huán)丙沙星(CIP)、左旋氧氟沙星(LEV)、替考拉寧(TEC)、復(fù)方磺胺甲惡唑(SXT)、呋喃妥因(F)、氨芐西林/舒巴坦(SAM)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、亞胺培南(IMP)、頭孢吡肟(FEP)15種藥物的藥敏情況。用頭孢西丁紙片

3、法篩選MRSA，對(duì)篩選所得MRSA菌株用E-test試條測其對(duì)萬古霉素的MIC值。(2)對(duì)初篩試驗(yàn)所得到的MRSA菌株進(jìn)行mecA基因擴(kuò)增，用以確證MRSA。(3)對(duì)確證的MRSA菌株分別進(jìn)行SCCmec分型、Spa分型及ERIC-PCR同源性分析。
　　 結(jié)果：(1)回顧性分析結(jié)果：2007年至2009年分別檢出金黃色葡萄球菌34株、97株、103株，其中MRSA菌株分別為2株、41株、30株，MRSA的檢出率為5.88％、4

4、2.27％、29.13％；其中痰標(biāo)本的檢出率最高，占87.6％，其次是胸水、分泌物各占2.7％，其它占7％；2007年僅檢出兩株MRSA，分布在腎內(nèi)科和神經(jīng)外科，2008年和2009年在院里其它科室相繼檢出MRSA菌株，以神經(jīng)外科的檢出率最高，占31.5％，其次是呼吸內(nèi)科，檢出率占17.8％；MRSA對(duì)青霉素、紅霉素、克林霉素、慶大霉素、環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星、亞胺培南、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢吡肟的耐藥率3年中幾乎均

5、>90.0％；對(duì)呋喃妥因、復(fù)方新諾明的耐藥率也在上升；在3年中和平醫(yī)院未發(fā)現(xiàn)耐萬古霉素的MRSA，所有MRSA菌株對(duì)萬古霉素的MIC值在0.5～2μg/ml范圍。(2)mecA基因檢測結(jié)果：頭孢西丁紙片法篩選所得73株MRSA菌株，經(jīng)PCR法檢測mecA基因，全部出現(xiàn)310bp的mecA基因條帶，與陽性對(duì)照菌株ATCC43300擴(kuò)增結(jié)果一致。本次實(shí)驗(yàn)所檢測73株MRSA菌株頭孢西丁紙片的抑菌圈直徑范圍為6mm～9 mm，初篩試驗(yàn)和確證試

6、驗(yàn)符合率為100％。(3)多重PCR SCCmec基因擴(kuò)增結(jié)果：所檢測的73株MRSA的SCCmec的多重PCR擴(kuò)增分型結(jié)果全部出現(xiàn)147bp的mecA基因條帶，其中71株同時(shí)出現(xiàn)280bp條帶，為SCCmecⅢ型的MRSA，2株除147 bp的mecA基因條帶外，未擴(kuò)增出其他條帶，為不能分型菌株。(4)Spa分型結(jié)果：73株MRSA的Spa型別為t03072株(2007年2株，2008年41株，2009年29株)，t3041株(200

7、9年11月檢出)，分別占98.6％、1.4％。(5)ERIC-PCR分型結(jié)果73株MRSA菌株ERIC-PCR凝膠成像呈6種指紋條帶，其中A型66株，A’型1株；B型2株；C型2株；D型1株；E型1株。應(yīng)用GENETOOLS圖譜分析軟件分析，A與A’相似度值為88.9％，大于80％，為同一亞型，代表同一克隆株，故可分為A、B、C、D、E共5型。(6)三年中神經(jīng)外科檢出23株MRSA菌株均為SCCmecⅢ-t030，A型，是同一克隆株在科

8、室內(nèi)的傳播，且在2008年8月份出現(xiàn)一次小的暴發(fā)感染。
　　 結(jié)論：(1)和平醫(yī)院檢出MRSA主要分布在外科病房，其中神經(jīng)外科出現(xiàn)一次小規(guī)模的暴發(fā)感染，經(jīng)同源性分析，檢出菌為SCCmecⅢ-t030，ERIC-PCR分型為A型的同一克隆株；MRSA菌株耐藥率較高，但還未出現(xiàn)耐萬古霉素金黃色葡萄球菌，其對(duì)萬古霉素的MIC值處在0.5～2μg/ml范圍內(nèi)。(2)和平醫(yī)院分離的MRSA菌株多數(shù)為SCCmecⅢ-t030，ERIC-PC