自發(fā)三陰乳腺癌小鼠模型研究.pdf

1、研究目的：
　　1.通過比較43例三陰乳腺癌和156例非三陰乳腺癌患者臨床病理資料和預后生存，回顧性分析研究三陰乳腺癌的臨床病理特征和影響其預后生存的因素。
　　2.通過檢測津白2(Tientsin Albinao2 strain，TA2)小鼠乳腺癌生物學行為及免疫表型特征，比較分析TA2小鼠乳腺癌與人三陰乳腺癌的特征。并通過分析妊娠對TA2小鼠乳腺癌生長的影響及小鼠乳腺癌病毒(mouse mammary tumorviru

2、s，MMTV)與TA2小鼠乳腺癌發(fā)生的關系，研究TA2小鼠乳腺癌發(fā)生的機制。
　　方法：
　　1.第一部分研究選取于天津醫(yī)科大學總醫(yī)院病理科1997-2004年間乳腺浸潤性導管癌手術治療的臨床和病理資料完整的患者199例，比較三陰乳腺癌患者與非三陰乳腺癌患者臨床病理學指標(年齡、腫瘤大小、腋淋巴結轉移、治療方式、局部復發(fā)及遠處轉移)之間是否存在差異，運用Kaplan-Meier生存分析比較兩組患者的生存預后情況。
　　

3、2.收集TA2自發(fā)乳腺癌小鼠33只，觀察TA2小鼠乳腺癌生物學行為，H&E染色觀察自發(fā)乳腺癌形態(tài)學特征，免疫組織化學染色檢測ERα、PR、p53、PCNA、CylinD1和CK5/6在乳腺癌組織的表達。取TA2小鼠乳腺癌細胞瘤株接種于妊娠TA2小鼠，檢測妊娠環(huán)境下腫瘤的生長；電化學方法檢測小鼠血清雌二醇與孕酮濃度。電鏡觀察TA2乳腺癌組織中小鼠乳腺癌病毒的表達。使用組織基因組DNA提取試劑盒(DP304-02，Tianjin，China

4、)提取基因組DNA。采用Tirzol法(Invitrogen，USA)提取TA2乳腺癌小鼠癌組織、妊娠小鼠乳腺癌組織和乳腺組織及正常TA2乳腺組織總RNA，逆轉錄至cDNA，Real-timePCR檢測MMTV的3’端長末端重復序列(Long terminal repeat，LTR)mRNA的表達量，并檢測妊娠期小鼠乳腺癌組織的ERα、PR mRNA表達量。
　　結果：
　　1.199名乳腺癌患者中三陰乳腺癌占21.6％，非

5、三陰乳腺癌占78.4％，其中位年齡分別為47歲和51歲。11.6％的三陰乳腺癌患者年齡小于40歲，在非三陰乳腺癌中為7.7％。確診時三陰乳腺癌的腫瘤直徑均大于2cm，而16.0％的非三陰乳腺癌的腫瘤直徑未超過2cm，二者在腫瘤體積上的差別有統(tǒng)計學意義(x2=8.432，P=0.015)。術后病理檢查顯示三陰乳腺癌與非三陰乳腺癌淋巴結轉移差別無統(tǒng)計學意義(x2=3.815，P=0.148)，三陰乳腺癌臨床分期多為Ⅱ或Ⅲ期，而非三陰乳腺癌臨

6、床Ⅰ期占20.5％，二者的臨床分期差別有意義，但組織學分級差別沒有顯著性。術前4.7％三陰乳腺癌患者接受了化療，而僅1.3％非三陰乳腺癌患者有術前化療。術后55.8％三陰乳腺癌患者接受了化療，有44.9％非三陰乳腺癌患者接受了化療，兩者術后、術前化療差別無統(tǒng)計學意義(x2=1.619，P=0.230；x2=1.943，P=0.205)。
　　隨訪過程中4.7％的三陰乳腺癌患者出現(xiàn)局部轉移復發(fā)，在非三陰乳腺癌中為1.9％，兩組患者的

7、腫瘤轉移復發(fā)率無差別(x2=1.024，P=0.295)。其中三陰乳腺癌中6名(14.0％)患者出現(xiàn)遠處轉移，包括多部位轉移，轉移部位主要為肺、肝、骨及腦，出現(xiàn)轉移的比例顯著大于非三陰乳腺癌的3.8％(x2=6.077，P=0.024)。Kaplan-Meier生存分析表明三陰乳腺癌預后較非三陰乳腺癌差(x2=29.098，P=0.000)。
　　2.TA2小鼠乳腺癌組織形態(tài)與人浸潤性乳腺癌相似，癌細胞為形態(tài)相近的小圓細胞，分化程

8、度低，核分裂象多見，癌巢中央易出現(xiàn)壞死，不表達ER，PR和HER2，呈三陰表型，部分乳腺癌細胞表達p53，CyclinD和PCNA，在TA2小鼠自發(fā)乳腺癌組織內(nèi)其表達水平也較高。
　　小鼠乳腺癌動物模型組織H&E染色證實轉移灶腫瘤細胞與原發(fā)灶在形態(tài)上存在一致性。取小鼠腫瘤細胞皮下接種于妊娠小鼠，待成瘤后測量腫瘤大小，腫瘤生長曲線顯示妊娠組腫瘤生長速度顯著高于對照組(t=4.142，P=0.000)。電化學檢測結果顯示妊娠TA2小鼠

9、和自發(fā)乳腺癌小鼠血清孕酮水平均顯著高于正常小鼠的(P均<0.01)。而妊娠期TA2小鼠乳腺組織較其乳腺癌組織高表達ERα和PRmRNA(t=12.245，10.933，P=0.000，0.001)。妊娠組腫瘤組織內(nèi)瘤細胞增殖更活躍，分裂象多見。與對照組乳腺癌相比，妊娠組瘤組織內(nèi)PCNA陽性率都較對照組高。
　　電鏡觀察顯示TA2小鼠乳腺癌細胞內(nèi)存在MMTV病毒顆粒。Real-time PCR結果顯示在妊娠TA2小鼠乳腺和其乳腺癌組

10、織內(nèi)的MMTV LTR表達水平高于正常TA2乳腺癌組織內(nèi)的表達量，三者間有顯著差異(P均=0.001)。
　　結論：
　　1.三陰乳腺癌多發(fā)生于年輕女性，尤以絕經(jīng)前女性多見。且確診時原發(fā)腫瘤體積較大，分期較晚，易發(fā)生遠處轉移，生存時間較非三陰乳腺癌短，生活質量差。
　　2.TA2小鼠自發(fā)乳腺癌的生物學行為，病理形態(tài)特征及免疫表型均與人三陰乳腺癌極為相似，是研究人三陰乳腺癌的一個良好動物模型。
　　3.TA2小鼠乳