辛伐他汀對(duì)LPS誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞eNOS-iNOS表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]
　　 研究辛伐他汀對(duì)LPS誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)的內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA及蛋白表達(dá)的影響,初步探討辛伐他汀在膿毒癥中調(diào)節(jié)磷脂酰肌醇-3磷酸/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的可能分子機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供理論支持。
　　 [方法]
　　 體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV304,將細(xì)胞培養(yǎng)于25ml培養(yǎng)瓶及接種于6孔培養(yǎng)板,分對(duì)照(Control

2、)組、LPS組、LPS+辛伐他汀組以及LPS+Sta+PI3K抑制劑組,分別加溶劑、LPS、LPS+辛伐他汀、LPS+辛伐他汀+Ly294002處理各組細(xì)胞,分別在2h,6h,12h時(shí)間提取各組細(xì)胞mRNA,用RT-PCR測(cè)內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表達(dá)量。取6h時(shí)間點(diǎn)裂解各組細(xì)胞,用Western-blot的方法測(cè)其裂解液的eNOS及iNOS蛋白表達(dá)水平,該實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
　　 [結(jié)

3、果]
　　 1.各組細(xì)胞不同時(shí)點(diǎn)內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表達(dá)
　　 Control組各時(shí)間點(diǎn)均有少量表達(dá),各時(shí)間點(diǎn)變化不明顯(p＞0.05);LPS組2h時(shí)間點(diǎn)起,且隨時(shí)間推移,表達(dá)量逐漸減少,有明顯的時(shí)效性,組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01),與對(duì)照組相比,2h稍有增加(p＜0.05),6h、12h表達(dá)量顯著減少(p＜0.05);LPS+Sta組的表達(dá)量趨勢(shì)與LPS組類似,但各時(shí)點(diǎn)表達(dá)較LPS

4、組明顯增加(p＜0.01),組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);LPS+Sta+Ly組的各時(shí)點(diǎn)表達(dá)量明顯低于LPS+Sta組(p＜0.05),其表達(dá)趨勢(shì)與LPS組類似但2h和6h高于LPS組(p＜0.01),組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。
　　 2.各組細(xì)胞不同時(shí)點(diǎn)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表達(dá)
　　 Control組iNOS mRNA微量表達(dá),各時(shí)間點(diǎn)變化不明顯(p＞0.05)

5、;LPS組各時(shí)點(diǎn)與對(duì)照組的相比顯著增高(p＜0.01),從2h開(kāi)始開(kāi)始升高,6h達(dá)高峰,12h開(kāi)始下降,有明顯的時(shí)效性,組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);LPS+Sta組各時(shí)點(diǎn)表達(dá)也升高,變化規(guī)律類似LPS組,但各時(shí)點(diǎn)顯著低于LPS組(p＜0.05),組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);LPS+Sta+Ly組的表達(dá)量趨勢(shì)與LPS組類似,且各時(shí)點(diǎn)表達(dá)量較LPS+Sta組顯著增加(p＜0.05),組內(nèi)各時(shí)點(diǎn)比較差異

6、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)。
　　 3.不同干預(yù)組細(xì)胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表達(dá)
　　 藥物干預(yù)后6h各組細(xì)胞裂解液的Western-blot結(jié)果顯示Control組有一定量的基礎(chǔ)表達(dá),LPS組表達(dá)顯著降低,與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01),LPS+Sta組表達(dá)顯著增加,與LPS組及對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01),但LPS+Sta+Ly組的表達(dá)較LPS+Sta組明顯減少(p＜0.0

7、1),但仍高于LPS組(p＜0.01),而與對(duì)照組的水平相近(p＞0.05)。
　　 4.不同干預(yù)組細(xì)胞誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表達(dá)
　　 藥物干預(yù)后6h時(shí)各組細(xì)胞裂解液的Western-blot結(jié)果顯示Control組有微量表達(dá),LPS組表達(dá)較對(duì)照組顯著增加(p＜0.01),LPS+Sta組表達(dá)較LPS組明顯減少但仍高于對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01),LPS+Sta+Ly組的表達(dá)較LPS+Sta組

8、及對(duì)照組均明顯增加(p＜0.01),但較LPS組有所減少(p＜0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.辛伐他汀能逆轉(zhuǎn)LPS所誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞eNOS mRNA和蛋白的表達(dá)下降。
　　 2.辛伐他汀能抑制LPS所誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞iNOS mRNA和蛋白的過(guò)量表達(dá)。
　　 3.辛伐他汀可能是通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路增加eNOS mRNA和蛋白的表達(dá),抑制iNOS mRNA和蛋白的過(guò)量表達(dá)從而調(diào)整eNOS/