利用噬菌體展示技術(shù)篩選肺癌特異性多肽及新的腫瘤標志物.pdf

1、廣東藥學院碩士學位論文利用噬菌體展示技術(shù)篩選肺癌特異性多肽及新的腫瘤標志物姓名：石磊申請學位級別：碩士專業(yè)：藥劑指導教師：臧林泉陳一岳20090501廣東藥學院碩士研究生學位論文中文摘要II我們將這10條序列分別命名為zs1、zs2zs10。其中zs6出現(xiàn)了13次，重復(fù)的頻率最高，達到了54.2%；zs6編碼由3個Thr(T)，2個Leu(L)，2個His(H)，1個Ala(A)，1個Asp(D)，1個Arg(R)，1個Pro(P)，1

2、個Trp(W)組成的12肽，其氨基酸序列為ADHPPW。該序列與包括肺癌在內(nèi)的惡性腫瘤的關(guān)系尚未見文獻報道。我們通過化學方法合成多肽zs6并部分標記綠色熒光素異硫氰酸（FITC）。首先，利用細胞免疫熒光、組織免疫熒光鑒定多肽[zs6]FITC與肺癌細胞、人肺癌組織結(jié)合的特異性和親和力。細胞免疫熒光實驗結(jié)果顯示[zs6]FITC對肺鱗癌細胞NCIH1299具有高親和力，并且對肺腺癌細胞A549同樣具有較高親和力，但與肺正常細胞MRC5結(jié)合

3、能力很弱。組織免疫熒光實驗結(jié)果顯示[zs6]FITC與人肺癌組織的結(jié)合能力顯著高于肺正常組織的；同時，人肺癌組織芯片實驗結(jié)果顯示，[zs6]FITC用于臨床肺癌鑒定的陽性率可達到24.8%。然后，通過多肽[zs6]FITC在荷瘤裸鼠體內(nèi)的分布實驗觀察[zs6]FITC在荷人肺癌A549裸鼠體內(nèi)的分布情況及其穩(wěn)定性。實驗結(jié)果顯示[zs6]FITC在腫瘤部位分布較多，有較好的靶向性，其次，在主要代謝器官肝臟、腎臟組織也有分布，但在裸鼠大腦、

4、心臟、肺臟等正常組織則未見及分布。為了進一步研究多肽zs6與肺癌的結(jié)合位點，我們通過化學方法合成生物素（Biotin）偶聯(lián)的多肽zs6，將[zs6]Biotin固定在親和素（avidin）包被的酶標板板上，與人肺癌cDNA文庫進行4輪篩選，挑取單克隆PCR擴增、純化后進行測序。對序列進行生物信息學分析，發(fā)現(xiàn)與該多肽特異性結(jié)合的肺癌抗原有Envoplakin、ATPase和987bp的未知蛋白。（1）目前，未見Envoplakin與肺癌相

5、關(guān)的任何報道。生物信息學分析發(fā)現(xiàn)Envoplakin在非小細胞肺癌（腺癌和鱗癌）有大量表達，而在小細胞肺癌則表達量較少。因此，可能可以作為非小細胞肺癌（腺癌和鱗癌）的診斷標志物。（2）ATPase廣泛存在與已知的各種生命形式，對肺癌研究不具有特異性價值；（3）987bp的未知序列經(jīng)生物信息學分析發(fā)現(xiàn)其與人類基因及基因組未見同源性，表明我們可能發(fā)現(xiàn)了新的腫瘤特有的抗原，確認其在肺癌與正常組織中的差異將闡明一新的肺癌診斷和治療靶點，為肺癌的