部分創(chuàng)面外用抗菌素、bFGF、EGF、rhGH對成纖維細(xì)胞、Hacat細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、燒傷患者在治療過程中將面臨很多復(fù)雜問題，其中最核心的問題始終是燒傷的創(chuàng)面愈合。創(chuàng)面修復(fù)過程中，創(chuàng)面換藥必不可少。理論上，應(yīng)用創(chuàng)面外用藥物的目的是為了更好的促進(jìn)創(chuàng)面愈合，只是側(cè)重點(diǎn)不同而已。在創(chuàng)面愈合的復(fù)雜機(jī)制中，成纖維細(xì)胞與表皮細(xì)胞的增殖和遷移是兩個(gè)重要方面。成纖維細(xì)胞是構(gòu)成肉芽組織的主要成分之一，可以合成和分泌膠原、纖維連接蛋白、透明質(zhì)酸等細(xì)胞外基質(zhì)，也可以分泌多種細(xì)胞因子參與創(chuàng)面愈合；表皮細(xì)胞的遷移、增殖、分化決定著創(chuàng)面再上皮化。目

2、前臨床外用藥物種類、劑型繁多，外用藥物的選擇不夠規(guī)范，一定程度上影響了臨床治療效果。為了進(jìn)一步探索創(chuàng)面外用藥物和rhGH對成纖維細(xì)胞、表皮細(xì)胞增殖的影響以及他們對成纖維細(xì)胞、表皮細(xì)胞的劑量-效應(yīng)關(guān)系，用不同種類、濃度的創(chuàng)面外用藥物作用于體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞、Hacat，觀察這些細(xì)胞的生物學(xué)特性改變，為臨床外用藥物的合理選擇提供間接的理論依據(jù)。 目的： 1、建立穩(wěn)定的成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)、Hacat傳代培養(yǎng)，應(yīng)用多種不同的創(chuàng)

3、面外用藥物、rhGH對細(xì)胞進(jìn)行刺激，觀察它們對細(xì)胞的影響。 2、觀察同一種藥物不同濃度對細(xì)胞的影響。 方法： 1、培養(yǎng)原代的成纖維細(xì)胞并進(jìn)行穩(wěn)定傳代，對Hacat細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 2、做成纖維細(xì)胞與Hacat細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)曲線以明確藥物刺激時(shí)培養(yǎng)細(xì)胞的密度和時(shí)機(jī)。 3、不同藥物對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行刺激后，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、MTT檢測培養(yǎng)細(xì)胞的增殖情況以及流式細(xì)胞儀檢測培養(yǎng)細(xì)胞周期。 4、

4、同一藥物不同濃度作用于培養(yǎng)細(xì)胞后，通過倒置顯微鏡、MTT實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀觀察對培養(yǎng)細(xì)胞的影響。 結(jié)果： 成纖維細(xì)胞： 1、形態(tài)學(xué)觀察：對照組、EGF組、及0.160、1.600g/LrhGH組成纖維細(xì)胞數(shù)目較多，呈長條形或梭形，輪廓不清，透明度高；丁胺卡那霉素組、慶大霉素組、氯霉素組、磺胺米隆組細(xì)胞數(shù)目較少，形態(tài)不規(guī)則，輪廓清晰，透明度低，細(xì)胞內(nèi)多有顆粒樣物質(zhì)及空泡。bFGF組、0.016g/LrhGH組細(xì)胞分布

5、均勻、密集，呈長條形或梭形，核分裂相多見，輪廓不清，透明度高。 2、MTT法檢測：與對照組吸光度OD值比較，各種劑量丁胺卡那霉素組、慶大霉素組、氯霉素組、磺胺米隆組成纖維細(xì)胞OD值均明顯降低(p＜0.05或0.01)。其中氯霉素組存在組內(nèi)差異，低濃度組OD值較中、高濃度組高(p＜0.05)。EGF組、及0.160、1.600g/LrhGH組OD值與對照組接近(p＞0.05)。 3、細(xì)胞周期檢測：與對照組細(xì)胞增殖指數(shù)PI比

6、較，0.210mg/L組丁胺卡那霉素組及0.160、1.600g/LrhGH組PI值無明顯變化(p＞0.05)而EGF組、bFGF組及0.016rhGH組bFGF組PI值明顯升高(p＜0.05)。 Hacat細(xì)胞： 結(jié)果： 1、形態(tài)學(xué)觀察：對照組、慶大霉素組、bFGF組、丁胺卡那霉素0.021ug/ml組Hacat數(shù)目較多，呈長條形或梭形，輪廓不清，透明度高；丁胺卡那霉素0.21ug/ml、2.1ug/ml組、氯

7、霉素組、磺胺米隆組、EGF組細(xì)胞數(shù)目較少，形態(tài)不規(guī)則，輪廓清晰，透明度低，細(xì)胞內(nèi)多有顆粒樣物質(zhì)及空泡。rhGH組細(xì)胞分布均勻、密集，呈長條形或梭形，核分裂相多見，輪廓不清，透明度高。 2、MTT法檢測：與對照組吸光度OD值比較，除慶大霉素組、丁胺卡那霉素0.021ug/ml組、bFGF組無變化外(p＞0.05)，其余各種劑量抗菌素組及EGF組Hacat細(xì)胞OD值均明顯降低(p＜0.05或0.01)。其中氯霉素組、丁胺卡那霉素組存

8、在組內(nèi)差異，低濃度組OD值較中、高濃度組高(p＜0.05)。rhGH組OD值與對照組比較均增高(p＜0.05)，且存在組內(nèi)差異，高濃度組OD值較中、低濃度組低(p＜0.05)。 3、細(xì)胞周期檢測：與對照組細(xì)胞增殖指數(shù)PI值比較，bFGF組PI值無明顯變化(p＞0.05)，0.210mg/L丁胺卡那霉素組、EGF組PI值明顯降低(p＜0.05)而0.160、0.016g/LrhGH組PI值明顯升高(p＜0.05)。 結(jié)論：

9、 1、不同創(chuàng)面外用藥物及rhGH對成纖維細(xì)胞、Hacat細(xì)胞生物學(xué)特性影響各異。 2、適當(dāng)劑量的rhGH可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞、Hacat細(xì)胞增殖而大劑量的rhGH并不能促進(jìn)成纖維細(xì)胞、Hacat細(xì)胞增殖。 3、氯霉素組對成纖維細(xì)胞和Hacat細(xì)胞增殖的抑制作用存在組內(nèi)差異，中、高濃度組對細(xì)胞增殖的抑制作用高于低濃度組。 4、丁胺卡那霉素組對Hacat細(xì)胞增殖的抑制作用存在組內(nèi)差異，中、高濃度組對細(xì)胞增殖的抑