黑鰻藤有效成分抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用研究.pdf

1、目的：采用小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型進一步評價黑鰻藤有效成分抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用，并通過體外佐劑性關(guān)節(jié)炎滑膜細胞培養(yǎng)試驗，探討黑鰻藤有效成分抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用的機制，其最終目標(biāo)是將黑鰻藤有效成分研究開發(fā)成抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的新藥。
　　方法：1.化學(xué)成分的提取分離黑鰻藤藤莖的乙醇提取物，用氯仿溶解，可溶部分經(jīng)硅膠柱層析，得到31個流分，流分27經(jīng)RP-18柱層析和HPLC分離純化，得到3個C21甾體苷類化合物。
　　2.化合物的

2、結(jié)構(gòu)鑒定通過HR-ESI-MS、13C-NMR、1H-NMR、DEPT等現(xiàn)代波譜技術(shù)鑒定化合物結(jié)構(gòu)。
　　3.對小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型的作用采用完全弗氏佐劑制備小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型，通過測定小鼠足腫脹度、胸腺指數(shù)與脾臟指數(shù)等，評價藥物的作用。
　　4.大鼠滑膜細胞的體外培養(yǎng)試驗采用 MTT法測定藥物對體外培養(yǎng)正常大鼠以及佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細胞增殖的抑制作用。
　　結(jié)果：1.從黑鰻藤藤莖中分離得到31個流分以及化合物Ⅰ、

3、化合物Ⅱ、化合物Ⅲ。
　　2.化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的化學(xué)結(jié)構(gòu)：化合物Ⅰ為12-O-乙?；?20-O-惕各?；馍汉鬈赵?-O-β-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）-6-去氧-3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖苷(黑鰻藤新苷 G)，化合物Ⅱ為12-O-乙?；?20-O-（N-甲基）鄰氨基苯甲?；馍汉鬈赵?-O-β-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）-6-去氧-3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-（1→4）-β-D

4、-磁麻吡喃糖苷(黑鰻藤新苷 K)，化合物Ⅲ為12-O-乙酰基-20-O-（N-甲基）鄰氨基苯甲?；淙馍汉鬈赵?-O-β-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）-3-O-甲基-6-去氧-β-D-阿洛吡喃糖基-（1→4）-β-D-夾竹桃吡喃糖基-（1→4）3-O-β-D-葡萄吡喃糖基-（1→4）-6-去氧-3-O-甲基-β-D-阿洛吡喃糖基-（1→4）-β-D-磁麻吡喃糖苷（黑鰻藤新苷 L）。
　　3.對小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型的實驗表明，黑鰻

5、藤流分Fr22高劑量組（0.1g/kg）、低劑量組（0.05g/kg）、Fr27高劑量組（0.08g/kg）、醋酸地塞米松對照組（0.0008g/kg）對小鼠致炎后的足腫脹度以及胸腺和脾臟指數(shù)均顯著低于模型對照組（P＜0.01）， Fr25高劑量組（0.12g/kg）、Fr27低劑量組（0.04g/kg）對小鼠致炎后的足腫脹度以及胸腺和脾臟指數(shù)均低于模型對照組（P＜0.05），說明Fr22高低劑量組、Fr27高劑量組對小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎具

6、有顯著的治療作用，而Fr25高劑量組、Fr27低劑量組對小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎均有治療作用。同時由表中還可以看出Fr22高劑量組對AA小鼠原發(fā)性足腫脹度的作用時間較其他藥物更持續(xù)。
　　4.體外細胞培養(yǎng)試驗表明，黑鰻藤流分Fr22、Fr22、Fr27和單體化合物Ⅱ能抑制體外培養(yǎng)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細胞的增殖，其中，流分 Fr22、Fr25、Fr27、在480μg/ml的濃度作用下，抑制率分別為74.57％、46.77%、19.31%，化

7、合物Ⅱ在480μg/ml的濃度作用下，抑制率分別為77.39%。
　　結(jié)論：1.從黑鰻藤中分離得到3個C21甾體苷類化合物，通過HR-ESI-MS、1H NMR、13C NMR、DEPT譜等現(xiàn)代波譜分析，確定了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的化學(xué)結(jié)構(gòu)，三者均為已知化合物。
　　2.流分Fr22、Fr25、Fr27對小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎所引起的炎癥以及胸腺和脾臟指數(shù)的升高，均有不同程度的抑制作用。
　　3.流分Fr22、Fr25、Fr27和單體