走馬胎抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎有效部位篩選研究.pdf

1、目的:
　　篩選走馬胎抗類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的有效部位，為走馬胎抗RA的物質(zhì)基礎(chǔ)研究及抗RA新藥開(kāi)發(fā)提供參考。
　　方法:
　　1.走馬胎化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)、總?cè)频暮繙y(cè)定及化學(xué)成分系統(tǒng)分離。通過(guò)顯色反應(yīng)對(duì)走馬胎中各類(lèi)化學(xué)成分進(jìn)行檢查;以齊墩果酸為對(duì)照品，建立走馬胎中總?cè)频暮繙y(cè)定方法;走馬胎用70％乙醇提取后拌硅藻土，70℃烘干，粉碎，依次用石油醚(30～60℃)、乙酸乙酯、水飽和的正丁醇、水進(jìn)行萃取。
　　

2、2.走馬胎抗RA有效部位篩選及其安全性研究。通過(guò)研究走馬胎石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位對(duì)角叉菜膠致小鼠足跖腫脹的影響、對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響、對(duì)醋酸致小鼠疼痛扭體的影響、對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞MH7A增殖抑制的影響篩選走馬胎抗RA的有效部位;參考最大給藥量實(shí)驗(yàn)，一次性給予150倍臨床等效劑量，研究走馬胎總提取物及各提取部位的安全性。
　　3.走馬胎石油醚部位抗佐劑性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究。本實(shí)驗(yàn)以S

3、D大鼠右后足皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑建立佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，通過(guò)AA大鼠的全身評(píng)分、關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、繼發(fā)側(cè)關(guān)節(jié)腫脹度、血清中MDA含量、致炎側(cè)足組織中PGE2含量、臟器指數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)走馬胎石油醚部位對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎的療效。
　　結(jié)果:
　　1.走馬胎含有氨基酸、多糖、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、異香豆素類(lèi)、三萜皂苷類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)等成分;以齊墩果酸為對(duì)照品，建立走馬胎中總?cè)频暮繙y(cè)定方法，回歸方程為A=0.0654C-0.1114(R=

4、0.9997)，樣品的濃度在3.333～16.667μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，精密度、60～120min內(nèi)穩(wěn)定性、重復(fù)性的RSD分別為0.84％、2.62％、1.43％，加樣回收率為97.64％(RSD=1.29)，均符合要求。
　　2.走馬胎各提取部位均能減輕角叉菜膠致小鼠足腫脹的腫脹度，同時(shí)抑制醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的增加，表現(xiàn)出明顯的抗炎作用，走馬胎能減少醋酸致小鼠疼痛扭體次數(shù)，表現(xiàn)出顯著的鎮(zhèn)痛作用，其中石油醚

5、部位抗炎、鎮(zhèn)痛作用較為突出;走馬胎石油醚部位能顯著抑制MH7A細(xì)胞的增殖，抑制作用呈劑量依賴(lài)性，IC50分別為68.1μg·mL-1;走馬胎總提取物及各部位提取物均無(wú)明顯的毒性，14d內(nèi)無(wú)動(dòng)物死亡，解剖后未見(jiàn)明顯的病理改變，體重與空白對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。以上結(jié)果提示，走馬胎石油醚部位可能有抗RA的作用，且無(wú)明顯毒性。
　　3.走馬胎石油醚部位各劑量組均能降低AA大鼠的全身評(píng)分，改善全身炎癥癥狀，同時(shí)能減少AA大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分

6、、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)及繼發(fā)側(cè)關(guān)節(jié)腫脹度，具有顯著的消腫作用，顯著改善關(guān)節(jié)炎癥癥狀;走馬胎石油醚部位各劑量能顯著降低AA大鼠血清中MDA含量，表現(xiàn)出一定的抗氧化作用;走馬胎石油醚部位各劑量能顯著降低AA大鼠的致炎側(cè)足組織中PGE2含量，說(shuō)明其抗炎作用與抑制PGE2合成或釋放有關(guān);走馬胎石油醚部位各劑量組均能降低AA大鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)，表現(xiàn)出一定的免疫抑制作用;走馬胎石油醚部位還能降低AA大鼠的肝臟指數(shù)。以上結(jié)果提示，走馬胎石油醚部位為抗RA