牛尾菜抗類風濕性關(guān)節(jié)炎作用和化學成分研究.pdf

1、類風濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一種常見的以關(guān)節(jié)組織慢性炎癥性病變?yōu)橹饕憩F(xiàn)的自身免疫性疾病。其主要的病理變化為關(guān)節(jié)滑膜細胞浸潤，滑膜翳形成，軟骨與骨組織的侵蝕。百合科菝葜屬植物牛尾菜Smilax riparia A.DC為《中國藥典》2005年版附錄所收載?！吨兴幋筠o典》記載“補氣活血，舒筋通絡。治氣虛浮腫，筋骨疼痛，偏癱，頭暈頭痛，咳嗽吐血，骨結(jié)核，白帶?！泵耖g用于類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療，但罕見其化學

2、成分和藥理作用的研究報道。
　　本論文采用現(xiàn)代藥理實驗方法研究牛尾菜乙醇提取物抗類風濕性關(guān)節(jié)炎作用。結(jié)果表明，牛尾菜乙醇提取物800 mg·kg-1和400 mg·kg-1劑量組對佐劑關(guān)節(jié)炎模型大鼠繼發(fā)性炎癥有明顯抑制作用，可明顯降低血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量，對角叉菜膠性足腫脹模型大鼠急性炎癥有明顯抑制作用；牛尾菜乙醇提取物1000 mg·kg-1和500 mg·kg-1劑量組對醋酸扭體模型小鼠和熱板模型小鼠疼痛

3、反應有明顯抑制作用；牛尾菜乙醇提取物800 mg·kg-1，400 mg·kg-1和200 mg·kg-1劑量組對福爾馬林模型大鼠疼痛反應的第一相和第二相均有明顯抑制作用。
　　綜合運用大孔吸附樹脂柱色譜、十八烷基鍵合硅膠柱色譜和制備液相色譜等手段從牛尾菜乙醇提取物中分離得到5個化合物；綜合運用ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、HSQC、HMBC、NOESY等波譜數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu)分別為：16-O-β-D-吡喃葡萄

4、糖-(22S)-膽甾-5-烯-3β,16β,22-三醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷（牛尾菜苷C，I），26-O-β-D-吡喃葡萄糖-(25S)-5,20(22)-二烯-3β,26-二醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷（牛尾菜苷D，II），26-O-β-D-吡喃葡萄糖-(25S)-5α-呋甾-20

5、(22)-烯-3β,26-二醇-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷（牛尾菜苷E，III），新替告皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷（牛尾菜苷F，IV）和人參皂苷Rd（V）其中化合物I-IV為新化合物。
　　本研究制備了兩種甾體皂苷對照品，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器（HPLC-ELSD）法

6、，不同色譜柱和流動相測定結(jié)果表明兩種甾體皂苷對照品均為一個主色譜峰，改變色譜柱和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰；以峰面積歸一化法測定兩種甾體皂苷對照品的純度，測得其含量分數(shù)分別為牛尾菜苷C98.52％和牛尾菜苷E98.91%；以不加校正因子的主成分自身對照法測定兩種甾體皂苷對照品的純度測定，測得其質(zhì)量分數(shù)分別為牛尾菜苷C98.63%和牛尾菜苷E99.01%，符合含量測定用對照品要求。
　　高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器（HPLC-ELS

7、D）法同時測定牛尾菜藥材中兩種甾體皂苷的含量。不同梯度洗脫條件對分離的影響研究結(jié)果表明選定的梯度洗脫條件可使兩種甾體皂苷與相鄰組分色譜峰達到基線分離；漂移管溫度和霧化氣流量對檢測的影響研究結(jié)果表明隨著漂移管溫度的升高和霧化器的載氣流速的升高，基線噪音降低，兩種甾體皂苷色譜峰面積降低，故選擇S/N最大的漂移管溫度105℃和霧化器載氣流速2.8 L·min-1；提取溶劑對提取的影響研究結(jié)果表明70%甲醇超聲提取30分鐘為最佳工藝；進行線性關(guān)