腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的SOX9和OP1雙基因載體聯(lián)合體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變椎間盤的生物學(xué)效應(yīng).pdf

1、目的:建立兔椎間盤退變模型;檢測(cè)腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus，AAV）介導(dǎo)的成骨蛋白-1(OP1)和SOX9雙基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染對(duì)兔退變椎間盤的生物學(xué)效應(yīng)。
　　 方法:成年新西蘭大白兔通過針刺纖維環(huán)法建立椎間盤退變模型，造模后3周分別進(jìn)行MRI檢測(cè)，觀察造模椎間盤變化，確認(rèn)兔退變椎間盤模型造模成功。將造模成功的動(dòng)物隨機(jī)分為五組(n=5)，分別A組:雙基因組（rAAV2-hSox9+rAAV2-hOp1）B

2、組:OP1組(rAAV2-hOp1)C組:SOX9組(rAAV2-hSox9)D組:EGFP組(rAAV2-EGFP)E組:PBS對(duì)照組。分別于造模椎間盤髓核內(nèi)注射20μ L雙基因組混合液（配制比例1∶1）、rAAV-OP1、rAAV-SOX9、rAAV-EGFP、PBS磷酸鹽緩沖液，于手術(shù)后3、6、9周后行核磁共振掃描觀察退變椎間盤變化情況，同時(shí)取退變椎間盤組織，RT-PCR方法觀察Ⅱ型膠原mRNA及蛋白多糖mRNA的變化。
　

3、　 結(jié)果:基因轉(zhuǎn)染后3周、6周、9周時(shí)，核磁共振掃描證實(shí)A、B、C組與D、E組，退變椎間盤T2加權(quán)像的信號(hào)強(qiáng)度明顯恢復(fù)，A組與B組、C組T2加權(quán)像的信號(hào)強(qiáng)度兩兩比較顯示具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);基因轉(zhuǎn)染后3周、6周、9周時(shí)，RT-PCR法證實(shí)A組、B組、C組在不同轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)了Ⅱ型膠原及蛋白多糖mRNA的表達(dá)，A組Ⅱ型膠原及蛋白多糖mRNA表達(dá)量均高于其他各組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);B、C組間Ⅱ型膠原mRNA