“三聯(lián)法”對兔膝骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞凋亡與增殖影響的研究.pdf

1、一、目的以中藥熏洗、手法彈撥、練功療法(以下簡稱“三聯(lián)法”)治療兔膝骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)，通過對膝關(guān)節(jié)軟骨標本進行透射電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察，采用流式細胞術(shù)、免疫組化、末端原位標記、原位雜交分別檢測軟骨細胞凋亡與增殖狀況。觀察“三聯(lián)法”治療兔膝OA的效果及其對OA軟骨細胞凋亡和增殖的影響，并通過與三法的單獨運用、外用扶他林對照比較，研究它們治療OA療效的差別，為臨床中醫(yī)藥外治OA提供實驗依據(jù)。 方法取56只四

2、月齡健康日本大耳白兔，隨機分為7組(每組8只)：8只不造模作為正常對照組，其余48只用結(jié)扎右側(cè)股靜脈的方法造模，8周后復(fù)制成右膝骨關(guān)節(jié)炎模型，隨后分為模型對照組、中藥熏洗組、功能鍛煉組、手法彈撥組、三聯(lián)法組、扶他林組，治療4周后取兔右膝關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)軟骨，取外側(cè)脛骨平臺制作石蠟切片，股骨外髁作超薄切片，剩余關(guān)節(jié)軟骨作軟骨細胞分離。分別進行透射電鏡觀察，采用流式細胞術(shù)、免疫組化、末端原位標記、原位雜交分別檢測軟骨細胞增殖和凋亡狀況。

3、結(jié)果(1)超微結(jié)構(gòu)觀察三聯(lián)法組軟骨細胞超微結(jié)構(gòu)接近正常對照組，可見細胞形態(tài)正常，細胞核呈卵圓形，染色淺，核仁清晰，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較多，胞膜完整，基質(zhì)勻稱；模型對照組細胞形態(tài)不規(guī)則，染色質(zhì)濃聚，核仁消失，細胞器減少，部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴大呈囊狀；其他各治療組除可見部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴大外，各組間軟骨細胞超微結(jié)構(gòu)相比無明顯差別。(2)軟骨細胞凋亡與增殖的影響軟骨細胞TUNEL免疫組化觀察凋亡細胞核呈棕黃色，主要位于軟骨淺層，各層均有分布。三聯(lián)法組的表達最低，與

4、其他各組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；軟骨細胞PCNA免疫組化觀察PCNA陽性細胞主要位于軟骨淺表層，三聯(lián)法組的表達最高，與其他各組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。(3)軟骨細胞中bcl-2mRNA表達的影響模型對照組、中藥熏洗組、功能鍛煉組、手法彈撥組、扶他林組、三聯(lián)法組顯著高于正常對照組(P＜0.05)；各治療組顯著高于模型對照組(P＜0.05)，其中尤以三聯(lián)法組最為顯著(P＜0.01)，但中藥熏洗組、功能鍛煉組、