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1、目的:觀察骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)軟骨細(xì)胞骨架的形態(tài)及定量檢測(cè)骨架各蛋白成分含量的變化,探討細(xì)胞骨架在骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制中的作用 方法:3月齡雄性新西蘭白兔8只,隨機(jī)分為2組,每組4只,實(shí)驗(yàn)組行前交叉韌帶切斷術(shù)(ACLT),造成骨關(guān)節(jié)炎模型,對(duì)照組切開關(guān)節(jié)囊,但不行ACIT。20周后處死兩組動(dòng)物,取左膝做大體標(biāo)本觀察,HE染色。右膝在無菌條件下取股骨滑車和股骨內(nèi)髁的全層軟骨,消化分離軟骨細(xì)胞并進(jìn)行單層培養(yǎng),倒
2、置顯微鏡下觀察細(xì)胞匯合至80%左右時(shí)進(jìn)行固定,利用免疫熒光抗體分別對(duì)各代軟骨CSK蛋白成分肌動(dòng)蛋白、波形蛋白、微管蛋白和紐蛋白進(jìn)行熒光染色后,用激光共聚焦掃描顯微鏡對(duì)軟骨細(xì)胞骨架進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察及熒光強(qiáng)度定量檢測(cè)。 結(jié)果:手術(shù)后20周OA關(guān)節(jié)軟骨明顯退變,大體評(píng)分明顯高于對(duì)照組(P<0.05),實(shí)驗(yàn)組中間纖維、微管、紐蛋白形態(tài)及分布發(fā)生明顯改變,熒光定量檢測(cè)顯示實(shí)驗(yàn)組中間纖維、微管和紐蛋白均低于正常組(P<0.001),微絲形態(tài)和
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