多種軟組織肉瘤來源于脂肪來源干細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化.pdf

1、目的：研究脂肪來源干細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化與軟組織肉瘤發(fā)生的關(guān)系。
　　 方法：以Balb/C小鼠腹腔脂肪組織為原料培養(yǎng)出脂肪來源干細(xì)胞，取第2代，生長旺盛，達(dá)到80％-90％融合的脂肪來源干細(xì)胞（ADSCs）分成兩組：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞用含有1 ug/ml 3-甲基膽蒽的培養(yǎng)基培養(yǎng)1 周,后用DMEM培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，第二組用含0.5％ DMSO的培養(yǎng)基培養(yǎng)作為對(duì)照組。用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)及生長速度、姬姆薩染色等方法驗(yàn)證細(xì)胞是否發(fā)生惡性轉(zhuǎn)

2、化。待細(xì)胞惡變后，用連續(xù)稀釋法獲得轉(zhuǎn)化細(xì)胞的單克隆并進(jìn)行培養(yǎng)；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的表面標(biāo)記；分析其中期染色體數(shù)目、檢測(cè)抑癌基因p53外顯子5-9的突變情況；并將足量的轉(zhuǎn)化細(xì)胞或單克隆注入裸鼠皮下以檢測(cè)其成瘤能力及形成腫瘤的病理性質(zhì)。
　　 結(jié)果：ADSCs經(jīng)3-甲基膽蒽處理一周，再繼續(xù)用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)4月后，部分細(xì)胞將表現(xiàn)出腫瘤細(xì)胞的一些特征：細(xì)胞體積顯著增大，鏡下可觀察到大量處于分裂中期的細(xì)胞；細(xì)胞增殖速度明

3、顯加快、倍增周期明顯縮短、細(xì)胞呈無限生長及增殖的態(tài)勢(shì)；細(xì)胞對(duì)血清的依賴性顯著下降；細(xì)胞極性及細(xì)胞間接觸抑制現(xiàn)象消失，出現(xiàn)大量復(fù)層生長的細(xì)胞群落，姬姆薩染色可見細(xì)胞呈集落性生長并染色深，提示細(xì)胞可能發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化細(xì)胞表達(dá)PCNA和VEGF-c，癌的標(biāo)記物；也表達(dá)SMA和vimentin，但不表達(dá)pan-CK，說明其間充質(zhì)來源性。轉(zhuǎn)化細(xì)胞的染色體均為非整倍體；p53的外顯子5-6存在有意義點(diǎn)突變，突變率為1％。惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞及其單克隆有成