采用基因芯片研究表觀遺傳修飾在胃癌發(fā)生機(jī)制中的作用.pdf

1、目的:研究表觀遺傳修飾在胃癌發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法:收集我科2007.10～2008.01病理確診的8例胃癌患者腫瘤組織和正常胃粘膜組織，采用染色質(zhì)免疫共沉淀聯(lián)合芯片技術(shù)（ChIP-chip）在細(xì)胞全基因組范圍內(nèi)對(duì)兩種組織細(xì)胞內(nèi)組蛋白H3K27位點(diǎn)三甲基化水平進(jìn)行高通量的檢測(cè)，用染色質(zhì)免疫共沉淀-實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（ChIP-qPCR）驗(yàn)證芯片檢測(cè)結(jié)果，采用熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)兩種組織細(xì)胞H

2、3K27me3水平存在顯著差異的目的基因mRNA表達(dá)水平，最后用甲基化DNA免疫沉淀-定量PCR（MeDIP-qPCR）方法檢測(cè)目的基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA甲基化水平。
　　 結(jié)果:和正常胃粘膜組織細(xì)胞相比較，胃癌腫瘤細(xì)胞全基因組范圍共篩選出227個(gè)基因組蛋白H3K27me3水平存在顯著差異，其中有67個(gè)基因顯示組蛋白H3K27三甲基化水平增高，160個(gè)基因組蛋白H3K27三甲基化水平降低；ChIP-qPCR技術(shù)檢測(cè)兩種組織細(xì)胞挑選

3、基因組蛋白H3K27三甲基化水平的差異與CpG島芯片檢測(cè)結(jié)果一致，兩種組織細(xì)胞挑選基因的mRNA表達(dá)水平和DNA甲基化水平均存在顯著差異。
　　 結(jié)論:與正常胃粘膜細(xì)胞相比，胃癌腫瘤細(xì)胞多個(gè)基因組蛋白H3K27三甲基化水平存在顯著改變；基因組蛋白H3K27三甲基化對(duì)調(diào)控基因表達(dá)發(fā)揮沉默效應(yīng)；挑選基因DNA甲基化水平亦存在明顯變化，挑選基因DNA甲基化和組蛋白H3K27me3兩種表觀修飾方式存在相互作用，DNA甲基化修飾作用可能存