Kupffer細(xì)胞在高脂誘導(dǎo)C57bl-6j小鼠胰島素抵抗中作用的研究.pdf

1、目的：研究Kupffer細(xì)胞在高脂喂養(yǎng)所致C57bl/6j小鼠胰島素抵抗中的作用。
　　方法：30只7周齡C57bl/6j小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,隨機分為三組:正常對照組(NC)、高脂對照組(HFC)和高脂干預(yù)組(HFI)。NC組普通飼料喂養(yǎng)12周;HFC組高脂飼料(D12492)喂養(yǎng)12周;HFI組高脂飼料(D12492)喂養(yǎng)12周,腹腔注射三氯化釓(GdCl3)清除Kupffer細(xì)胞(每周2次,每次20mg.kg-1);NC組和

2、HFC組按體重給予等量的生理鹽水腹腔注射。12周后行IPGTT和ITT,留取血清檢測血脂水平,并測定組織(肝臟、脂肪組織、腓腸肌)中脂質(zhì),留取腓腸肌行骨骼肌葡萄糖攝取實驗;ELISA法檢測血液中TNF-α和胰島素水平,以及肝臟組織、脂肪組織、腓腸肌內(nèi)TNF-α和NF-κB亞單位p65表達(dá)水平;RT-PCR法檢測肝臟中CD68,F4/80的表達(dá);Western法檢測肝臟以及骨骼肌中AMPK,p-AMPK和LC3的表達(dá)。
　　結(jié)果：高

3、脂喂養(yǎng)小鼠的肝臟中,作為Kupffer細(xì)胞活性標(biāo)志物的CD68、F4/80mRNA表達(dá)水平明顯高于正常對照組,表明在高脂喂養(yǎng)下,Kupffer細(xì)胞活化,經(jīng)腹腔注射GdCl3去除Kupffer細(xì)胞后,CD68以及F4/80mRNA表達(dá)水平明顯低于高脂喂養(yǎng)組;高脂喂養(yǎng)小鼠體重,血清TG、TC、FFA,肝臟TG、FA,骨骼肌TG、FA,脂肪TG、FA明顯高于正常對照組,腹腔注射GdCl3去除Kupffer細(xì)胞后,小鼠上述指標(biāo)明顯低于高脂組;高

4、脂組血清胰島素水平、IPGTT以及ITT曲線下面積、HOMA-IR明顯高于正常對照組,而骨骼肌對葡萄糖的攝取,HOMA-％S則明顯低于正常對照組,提示高脂喂養(yǎng)導(dǎo)致動物發(fā)生胰島素抵抗,注射GdCl3可以逆轉(zhuǎn)上述改變;高脂喂養(yǎng)小鼠機體呈現(xiàn)炎癥反應(yīng),表現(xiàn)為血清TNF-α,肝臟、腓腸肌、脂肪TNF-α以及NF-κB活性明顯高于正常對照組,注射GdCl3小鼠上述指標(biāo)均明顯降低;高脂喂養(yǎng)組小鼠肝臟、骨骼肌p-AMPK表達(dá)水平降低,表明肝臟和骨骼肌A

5、MPK的活性下降,同時代表肝臟自噬水平的LC3表達(dá)水平也明顯降低,說明肝臟細(xì)胞自噬水平降低,通過腹腔注射GdCl3后,AMPK活性、肝臟自噬水平增強。
　　結(jié)論：高脂喂養(yǎng)小鼠出現(xiàn)顯著性胰島素抵抗的同時,還出現(xiàn)了全身及肝臟炎癥水平增強,Kupffer細(xì)胞激活、AMPK活性以及肝臟自噬水平降低等病理改變。而在去除Kupffer細(xì)胞后,可以明顯減輕多種病理改變并改善胰島素抵抗,提示Kupffer細(xì)胞的活化導(dǎo)致的炎癥是高脂所致胰島素抵抗的