HSF1-HSPs在C57BL-6J小鼠耳蝸的表達.pdf

1、目的：研究在年齡相關性聽力損失(Age-relatedHearingLoss,AHL)模型中,熱休克轉錄因子1(HeatShocktranscriptionFactor1,HSF1)mRNA及HSF1蛋白、熱休克蛋白(HeatShockProtein,HSP)70及90在內(nèi)耳的表達變化,并探討在AHL模型中三者的關系以及在AHL發(fā)生發(fā)展中可能的作用機制。
　　方法：分別隨機選取4周、12周、24周、44周齡C57BL/6J小鼠為實

2、驗對象,應用實時定量聚合酶鏈反應(Realtime-polymerasechainreaction,RT-PCR)檢測HSF1在mRNA水平上在各年齡組小鼠內(nèi)耳的表達水平;采用免疫組織化學、免疫熒光組織化學及westernblot方法確定HSF1、HSP70、HSP90蛋白在耳蝸內(nèi)的定位及含量變化。
　　結果：RT-PCR結果顯示HSF1在mRNA水平上,表達隨年齡增長而增加。免疫組織化學、免疫熒光組織化學顯示HSF1主要表達于C

3、57BL/6J小鼠耳蝸齒間細胞-螺旋板緣、螺旋嵴和螺旋韌帶,而毛細胞、血管紋和螺旋神經(jīng)節(jié)染色相對較弱,隨著年齡的增長,熒光強度逐漸增加,且在同一個耳蝸內(nèi),頂回的染色強度要強于中、底回;HSP70可表達于基底膜、前庭膜、齒間細胞-螺旋板緣、螺旋韌帶-螺旋嵴、螺旋神經(jīng)節(jié)等廣泛部位,但含量較少,且在同一個耳蝸內(nèi)同HSF1,頂回染色強于底回;HSP90表達相當廣泛,基底膜、前庭膜、螺旋韌帶-血管紋、齒間細胞-螺旋板緣及螺旋神經(jīng)節(jié)-神經(jīng)纖維均有明

4、顯的表達,隨著年齡的增長,兩種熱休克蛋白的免疫熒光均逐漸增加。Westernblot結果顯示HSF1及HSP90在各年齡組小鼠中均隨年齡的增長有增高的趨勢,而HSP70可能因為在組織內(nèi)的含量較低,而未見明顯條帶。
　　結論：本研究發(fā)現(xiàn)HSF1在C57BL/6J小鼠內(nèi)耳中主要表達于齒間細胞-螺旋板緣、螺旋嵴和螺旋韌帶等部位,且在蛋白質和mRNA水平上均隨年齡增長有增高的趨勢。HSP70和HSP90在內(nèi)耳中表達廣泛,也均在蛋白質水平上