sTRAIL-TMTP1融合蛋白的表達(dá)純化及生物學(xué)效應(yīng)研究.pdf

1、第一部分
　　 【目的】利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)純化sTRAIL-TMTP1融合蛋白，純化到足夠量后體外作用腫瘤細(xì)胞株，研究其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，體內(nèi)治療前列腺癌皮下瘤模型及胃癌原位模型，觀察其生物學(xué)效應(yīng)。
　　 【方法】應(yīng)用PET原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)純化sTRAIL-TMTP1融合蛋白；應(yīng)用Western Blot及考馬斯亮藍(lán)染色檢測(cè)融合蛋白的表達(dá)；運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)融合蛋白對(duì)腫瘤細(xì)胞株凋亡的影響；建立前列腺癌細(xì)胞株P(guān)C-3M-

2、1E8皮下瘤模型，瘤旁注射融合蛋白治療；建立胃癌MKN-45sci原位模型，腹腔內(nèi)注射融合蛋白治療；量子點(diǎn)、免疫組織化學(xué)檢測(cè)融合蛋白的藥物代謝和腫瘤組織及其他器官細(xì)胞凋亡情況。
　　 【結(jié)果】用考馬斯亮藍(lán)染色結(jié)果：經(jīng)過(guò)純化后融合蛋白可濃縮至1mg/ml濃度；Western Blot在22KD附近可以被TRAIL抗體識(shí)別的條帶；在配對(duì)細(xì)胞株MDA-MB-231、MCF-7、PC-3M-1E8、PC-3M-2B4加入融合蛋白后48小

3、時(shí)，光鏡下出現(xiàn)明顯差異，Anexin-V、PI雙標(biāo)流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡，在高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在融合蛋白與對(duì)照組PBS中也存在顯著性差異；免疫組織化學(xué)檢測(cè)體內(nèi)藥物代謝，早期0.5-2h會(huì)出現(xiàn)腎臟一過(guò)性高表達(dá)，而后腫瘤組織中融合蛋白表達(dá)逐漸升高，至24h達(dá)到高峰，而心、肺等器官陰性表達(dá)；前列腺癌細(xì)胞PC-3M-1E8皮下瘤模型中，經(jīng)過(guò)治療后融合蛋白sTRAIL-TMTP1明顯效果好于對(duì)照組，治療一個(gè)周期（四周）后腫瘤直徑存在顯著

4、性差異；胃癌細(xì)胞MKN-45sci腫瘤原位模型治療后治療組和對(duì)照組之間原位腫瘤的體積、轉(zhuǎn)移灶的數(shù)量均存在顯著性差異；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中生存期組間也存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 【結(jié)論】能通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)純化融合蛋白sTRAIL-TMTP1，且融合蛋白對(duì)高轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞具有明顯的促凋亡作用，且其在體內(nèi)仍有明顯靶向腫瘤作用，體內(nèi)可抑制腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移，延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生存期。
　　 第二部分
　　 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是多數(shù)腫瘤治療中

5、的基礎(chǔ)，對(duì)腫瘤壞死因子(TNF)超家族的死亡受體已基本研究清楚，比如受體激活是的信號(hào)產(chǎn)生。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）受體（受體TRAILR1和TRAILR2）有希望成為腫瘤治療的靶標(biāo)。再次我們回顧一下近年來(lái)針對(duì)TRAIL受體進(jìn)行腫瘤治療的進(jìn)展。
　　 第三部分
　　 目的：觀察生長(zhǎng)分化因子5（GDF-5）對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠肌腱細(xì)胞及腱鞘滑膜細(xì)胞增殖的影響。為進(jìn)一步研究在體內(nèi)局部添加GDF-5以促進(jìn)損傷肌腱愈

6、合及改善外源性愈合所致粘連打下基礎(chǔ)。
　　 方法：MTT法測(cè)定不同濃度的GDF-5在體外對(duì)肌腱及腱鞘滑膜細(xì)胞增殖率的影響；流式細(xì)胞儀測(cè)定不同濃度的GDF-5在體外對(duì)肌腱及腱鞘滑膜細(xì)胞的凋亡率的影響。
　　 結(jié)果：GDF-5可以明顯促進(jìn)肌腱細(xì)胞的增殖，而對(duì)腱鞘滑膜細(xì)胞的增殖率的作用較弱。但對(duì)兩種細(xì)胞的凋亡無(wú)明顯影響。
　　 結(jié)論：添加一定濃度的GDF-5后肌腱細(xì)胞增殖率較腱鞘滑膜細(xì)胞提高更為明顯，而凋亡并未發(fā)生改變