1、蓖麻毒素A鏈蛋白的表達(dá)、純化與生物學(xué)活性測(cè)定2、抗蓖麻毒素A鏈蛋白的單克隆抗體制備及生物學(xué)特性研究.pdf

1、[目的]該實(shí)驗(yàn)為重點(diǎn)研究反式高爾基體在毒素細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中的作用,我們?cè)O(shè)計(jì)了一個(gè)反式高爾基體的靶向信號(hào)肽基因YQRL(Tyr-Gln-Arg-Leu)連接在RTA分子的羧基端,用原核表達(dá)蛋白體系,純化并測(cè)定RTA-YQRL與RTA蛋白對(duì)Hela(人宮頸癌細(xì)胞),WISH(人羊膜上皮細(xì)胞),SKOV-3(人卵巢癌細(xì)胞)三種細(xì)胞的毒性作用.[結(jié)論]該實(shí)驗(yàn)用基因工程方法原核表達(dá)了RTA蛋白和RTA-YQRL蛋白,利用RTA蛋白和F3GA的結(jié)合

2、特性,溫和、簡(jiǎn)單、有效地洗脫了目的蛋白.雖然原核表達(dá)的蛋白沒(méi)有糖鏈,但是體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)證明兩者仍具有較高的毒性.RTA-YQRL蛋白的細(xì)胞毒性約為RTA蛋白的2~40倍,提示高爾基體可能是毒素在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中的重要一環(huán).[目的]國(guó)外已有研究報(bào)道抗體分泌和毒素內(nèi)吞途徑可以互相影響;RTA與產(chǎn)生抗RTA單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞一起孵育時(shí),可與分泌途徑中的抗體結(jié)合從而中和RTA的細(xì)胞毒性作用.為研究抗RTA的單克隆抗體分泌和RTA內(nèi)吞兩條途