重組人P53腺病毒對人結(jié)腸癌和胃癌細胞的影響及其化療的增敏作用.pdf

1、目的:觀察重組人p53腺病毒感染人結(jié)腸癌細胞及不同分化程度的胃癌細胞后,外源性p53基因在腫瘤細胞內(nèi)的表達,對腫瘤細胞的增殖抑制及化療敏感性的影響;探討重組人p53腺病毒注射液(rAd-p53)抗腫瘤及化療增敏作用的機制。
　　 方法:
　　 1、不同濃度的rAd-p53及OXA單獨或聯(lián)合作用于結(jié)腸癌細胞后,CCK-8法測定細胞生長抑制率;免疫組化染色(S-P)檢測p53蛋白、凋亡蛋白bax、bcl-2在腫瘤細胞中的表達

2、;流式細胞術(shù)(FCM)檢測細胞凋亡率及凋亡蛋白Caspase-3的表達。
　　 2、不同濃度的rAd-p53及OXA單獨或聯(lián)合作用于不同分化程度的胃癌細胞后,MTT法測定細胞的生長抑制率;S-P檢測p53蛋白、凋亡蛋白bax、bcl-2在結(jié)腸癌、胃癌細胞中的表達;FCM檢測細胞凋亡率及凋亡蛋白Caspase-3的表達。
　　 結(jié)果:
　　 一.MTT及CCK-8法檢測結(jié)果
　　 1.不同濃度rAd-p53

3、、OXA單藥及聯(lián)合作用對結(jié)腸癌細胞SW1116生長的影響
　　 不同濃度rAd-p53、OXA單藥及聯(lián)合作用24h后,結(jié)腸癌細胞的生長即產(chǎn)生明顯抑制作用,隨著藥物濃度的增加及作用時間的延長,結(jié)腸癌細胞的生長抑制作用逐漸增強,且兩藥聯(lián)合作用對細胞生長的抑制作用明顯高于單藥。
　　 2.不同濃度rAd-p53、OXA單藥及聯(lián)合作用對不同分化程度的胃癌細胞SGC-7901(中分化)、BGC-823(低分化)、HGC-27(未分

4、化)生長的影響
　　 隨著藥物濃度的增加及作用時間的延長,對腫瘤細胞生長的抑制作用逐漸增強,且兩藥聯(lián)合作用對細胞的抑制作用明顯高于單藥,同時細胞分化程度越高,其藥物作用后的生長抑制作用越明顯,即:SGC-7901＞BGC-823＞HGC-27。
　　 二.免疫組織化學法檢測結(jié)果顯示
　　 1.rAd-p53作用于腫瘤細胞后,p53蛋白陽性表達于細胞核內(nèi),p53蛋白的陽性表達率較對照組顯著增高(P＜0.05),且隨

5、著rAd-p53濃度的增加而上升,但OXA濃度對p53蛋白的表達無影響(P＞0.05)。
　　 2.不同濃度rAd-p53、OXA單藥及聯(lián)合作用于腫瘤細胞后,均可下調(diào)bcl-2、上調(diào)bax蛋白的表達(P＜0.05),且隨著藥物濃度的增加,其上調(diào)bax或下調(diào)bcl-2的作用越顯著。
　　 三.FCM檢測結(jié)果顯示
　　 1.不同濃度rAd-p53、OXA單藥及聯(lián)合作用于腫瘤細胞后,與對照組相比,細胞凋亡率顯著增高(P

6、＜0.05)。
　　 2.藥物作用于腫瘤細胞后,凋亡蛋白Caspase-3表達水平明顯高于對照組(P＜0.05),且隨著藥物濃度的增加,Caspase-3蛋白的表達逐漸增加。提示Caspase-3可能參與了細胞凋亡過程。
　　 結(jié)論:
　　 1.rAd-p53能夠有效抑制人結(jié)腸癌(SW1116)及胃癌細胞(SGC-7901、BGC-823、HGC-27)的生長并誘導(dǎo)其凋亡,且隨藥物濃度及作用時間的增加,對細胞的生