PEI介導(dǎo)的E1A基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞放化療增敏效應(yīng).pdf

1、目的：腺病毒5型早期區(qū)A基因(early region 1A，E1A)是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)具有抑癌作用的基因，E1A蛋白能夠從正負(fù)兩種途徑調(diào)控多種基因的表達(dá)，具有誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化、逆轉(zhuǎn)其惡性表型、降低其體內(nèi)致瘤性和抗轉(zhuǎn)移等活性，但E1A基因在結(jié)腸癌治療的作用尚少見(jiàn)報(bào)道。聚乙烯亞胺(polyethylenimine，PEI)作為新型的非病毒載體已用于基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。本研究的目的是以自行合成的PEI納米凝膠為載體轉(zhuǎn)染E1A基因，并觀察E1A基因?qū)?/p>

2、結(jié)腸癌細(xì)胞體外生長(zhǎng)的抑制作用和對(duì)化療藥物及電離輻射的增敏效應(yīng)，并初步探討其的作用機(jī)理。 方法：經(jīng)PEI介導(dǎo)，將真核細(xì)胞高效表達(dá)E1A基因的重組質(zhì)粒psv-E1A導(dǎo)入人結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480，RT-PCR證實(shí)其轉(zhuǎn)染，G418篩選出陽(yáng)性克隆細(xì)胞。通過(guò)測(cè)繪生長(zhǎng)曲線和計(jì)算倍增時(shí)間，觀察EIA基因?qū)υ摷?xì)胞系生長(zhǎng)的抑制作用。用MTT法測(cè)定轉(zhuǎn)染E1A基因前后，順鉑、泰素、5-氟尿嘧啶、博來(lái)霉素和電離輻射對(duì)SW480細(xì)胞的效應(yīng)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)

3、染前后SW480細(xì)胞的細(xì)胞周期分布變化。 結(jié)果： 1．質(zhì)粒psv-E1A測(cè)序結(jié)果與基因庫(kù)E1A基因序列完全相符。 2．G418篩選出陽(yáng)性克隆細(xì)胞。 3．RT-PCR結(jié)果顯示PEI能轉(zhuǎn)染質(zhì)粒psv-E1A并有穩(wěn)定的表達(dá)。 4．流式細(xì)胞儀測(cè)細(xì)胞周期，與SW480細(xì)胞相比，SW480-E1A細(xì)胞S期比例由56.06％降至38.78％，呈下降趨勢(shì)(p<0.01)；G2/M期比例從3.86％增至28.06％

4、，增加顯著(p<0.01)；G1期細(xì)胞比例無(wú)顯著變化(p>0.05)。 5．臺(tái)盼藍(lán)染色法測(cè)量SW480細(xì)胞及SW480-E1A細(xì)胞數(shù)量，計(jì)算出不同的倍增時(shí)間。轉(zhuǎn)染E1A基因細(xì)胞群體生長(zhǎng)緩慢，倍增時(shí)間延長(zhǎng)(是未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的1．5倍)(p<0.01)。 6．轉(zhuǎn)染E1A基因后，SW480-E1A細(xì)胞對(duì)順鉑、博來(lái)霉索、泰素和電離輻射的敏感性顯著提高(p<0.01)，而對(duì)5-氟尿嘧啶的敏感性無(wú)明顯變化(p>0.05)。 結(jié)論