黃鱔抗菌活性物質(zhì)的制備及其抑菌效果的研究.pdf

1、本文初步研究黃鱔肝臟、腸道等組織粗提物的抗菌活性，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步分離純化黃鱔腸道和肝臟抗菌肽，并對(duì)其相關(guān)性質(zhì)進(jìn)行研究。共包括以下三個(gè)試驗(yàn)?！　≡囼?yàn)一、黃鱔抗菌肽的粗提及其抗菌活性的測(cè)定本試驗(yàn)采用Tris-HC1提取法，于腹腔注射不同劑量未滅活的致病性嗜水氣單胞菌菌液(1×10<'9>個(gè)/ml)對(duì)黃鱔進(jìn)行誘導(dǎo)，在誘導(dǎo)后的不同時(shí)間分別取黃鱔黏液、血液、皮膚、肝臟、脾臟、腸道和腎臟組織，經(jīng)過(guò)組織勻漿、Tris-HC1抽提、冷凍離心等手段分

2、離抗菌肽粗提物，并用抑菌圈法測(cè)定黃鱔抗菌肽粗提物的抗菌活性。抑菌圈法檢測(cè)結(jié)果(圖1)顯示：黃鱔內(nèi)臟器官以肝臟和腸道的抑菌效果最強(qiáng)，其抑菌圈直徑分別為11.83 mnl和10.82mm?！　≡囼?yàn)二、黃鱔肝臟與腸道抗菌物質(zhì)的分離純化本研究選擇黃鱔肝臟和腸道粗提物進(jìn)行純化，采用Septladex G-25凝膠柱(柱規(guī)格1.5×50cm)脫鹽后，再用Sephadex G-50凝膠柱進(jìn)行分子篩層析黃鱔抗菌肽，層析柱規(guī)格為1.5×30cm，洗脫液

3、為0.04mol/L的磷酸鹽緩沖液，pH7.2，線性流速為0.2ml/min，1ml/管收集。肝臟和腸道分別得到兩個(gè)洗脫峰，峰之間區(qū)分非常明顯，抑菌檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，分離的兩種組織第二洗脫峰均對(duì)嗜水氣單胞菌具有殺滅作用；對(duì)有抑菌活性的洗脫峰用Macro-Prep High S陽(yáng)離子交換柱進(jìn)行離子交換層析，層析柱規(guī)格為2.5×20cm，洗脫緩沖液為0.04mol/L的磷酸鹽緩沖液進(jìn)行梯度洗脫，線性流速1ml/min，1ml/管，分別得到一個(gè)洗脫峰

4、。抑菌檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，通過(guò)Macro-Prep High S陽(yáng)離子交換柱層析的兩峰對(duì)嗜水氣單胞菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌均有殺滅作用，其中對(duì)嗜水氣單胞菌的抑制效果最好，大腸桿菌次之。通過(guò)Macro-Prep High S陽(yáng)離子交換柱層析得到的活性峰成分經(jīng)過(guò)SDS-聚丙烯酞胺凝膠電泳，結(jié)果表明，電泳圖譜均為單一條帶，說(shuō)明分離的黃鱔抗菌肽已經(jīng)達(dá)到電泳純，其分子量約為6500Da?！　≡囼?yàn)三、黃鱔腸道抗菌肽抗菌譜的測(cè)定及相關(guān)性質(zhì)研究研究顯示，分

5、離純化的黃鱔腸道抗菌肽對(duì)G-細(xì)菌和G<'+>細(xì)菌均有不同程度的抑制或殺滅作用，但不同的微生物對(duì)其敏感性不同。其對(duì)致病性嗜水氣單胞菌、大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌的最小抑菌濃度分別為0，048ug/uL、0.195ug/uL、3.125 ug/uL、12.5 ug/uL、50 ug/uL?！　↑S鱔抗菌肽具有以下性質(zhì)：　　(1)耐熱性，將分離純化到的黃鱔抗菌肽分別經(jīng)100℃的沸水浴0 min，10 min，30 min，