大前庭水管綜合征患者基因芯片法與DNA測(cè)序法基因診斷的對(duì)比研究.pdf

1、目的：為了研究大前庭水管綜合征(Enlarged vestibular aqueductsyndrome，EVAS)在中國(guó)人中的基因型和分子流行病學(xué)特點(diǎn)，我們應(yīng)用耳聾基因芯片聯(lián)合DNA測(cè)序法對(duì)30例大前庭水管綜合征患者進(jìn)行了相關(guān)基因SLC26A4、FOXI1的突變檢測(cè)，探討適合中國(guó)人大前庭水管綜合征患者的基因診斷策略。
　　 方法：采集30例EVAS患者和50例聽(tīng)力檢測(cè)正常者的外周血，提取基因組DNA，用耳聾基因芯片檢測(cè)國(guó)人中S

2、LC26A4基因的2個(gè)熱點(diǎn)突變IVS7-2A>G和2168A>G。同時(shí)應(yīng)用DNA測(cè)序法對(duì)EVAS患者的SLC26A4基因7-8號(hào)外顯子和19號(hào)外顯子基因編碼區(qū)序列進(jìn)行檢測(cè)，以驗(yàn)證基因芯片檢測(cè)這兩個(gè)位點(diǎn)的準(zhǔn)確性。如檢測(cè)發(fā)現(xiàn)純合突變或復(fù)合雜合突變即停止篩查，如未發(fā)現(xiàn)突變或發(fā)現(xiàn)單純雜合突變則用DNA測(cè)序法篩查剩余外顯子，直至發(fā)現(xiàn)另一個(gè)突變或篩查完全部外顯子。同時(shí)對(duì)30例EVAS患者FOXI1的2個(gè)外顯子及相鄰的內(nèi)含子區(qū)域進(jìn)行突變檢測(cè)。采用DN

3、Astar軟件分析所有測(cè)序結(jié)果，判斷有無(wú)突變。
　　 結(jié)果：30例EVAS患者組中，基因芯片方法共檢出SLC26A4基因突變25例，檢出率為83.33％。正常人對(duì)照組發(fā)現(xiàn)一例IVS7-2A>G單雜合突變，EVAS患者組和正常人對(duì)照組的檢出率差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2檢驗(yàn)，P<0.01)。基因芯片發(fā)現(xiàn)突變的行DNA測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證，符合率為100％。對(duì)未發(fā)現(xiàn)突變或發(fā)現(xiàn)單雜合突變的患者，聯(lián)合DNA測(cè)序法進(jìn)一步檢測(cè)，有28例患者檢測(cè)出了S

4、LC26A4基因突變，檢出率為93.33％。但基因芯片法檢出率與DNA測(cè)序法檢出率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2檢驗(yàn)，P>0.05)。我們共發(fā)現(xiàn)了16種突變類型，其中4種為新的突變類型(G368X，IVS8-1G>T，IVS13+9C>T和Q696X)。在所有的突變中，IVS7-2A>G突變的發(fā)生率最高，其次為H723R和T410M。對(duì)FOXI1基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)兩個(gè)多態(tài)：279G>A，1044T>C。
　　 結(jié)論：SLC26A4基因突變是

5、導(dǎo)致大前庭水管綜合征的主要原因，其中IVS7-2A>G突變的發(fā)生率最高，其次為H723R和T410M。耳聾基因芯片對(duì)大前庭水管綜合征患者SLC26A4基因的兩個(gè)熱點(diǎn)突變檢出率高，能夠適用于一般的基因篩查。但對(duì)基因芯片未發(fā)現(xiàn)這兩種突變或僅發(fā)現(xiàn)單個(gè)突變的仍有必要采用DNA測(cè)序法進(jìn)一步檢測(cè)。發(fā)現(xiàn)的4種新突變類型對(duì)大前庭水管綜合征的分子病因研究和基因診斷具有重要意義。本研究中只檢測(cè)到FOXI1的兩個(gè)多態(tài)，未發(fā)現(xiàn)有意義的突變，證明其在大前庭水管綜