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1、浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文雌激素受體亞型ERα46在結(jié)直腸癌中的作用研究姓名:蔣海萍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師:滕理送20080401浙江大學(xué)博士研究生論文結(jié)直腸癌的關(guān)系,本課題檢測(cè)了ERa46在32對(duì)結(jié)直腸癌及其相對(duì)應(yīng)的J下常結(jié)直腸組織中的表達(dá)水平;構(gòu)建了ERQ46的真核表達(dá)載體,并在人結(jié)腸癌細(xì)胞系HT一29中得到穩(wěn)定表達(dá);研究了ERQ46介導(dǎo)雌激素對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞HT一29的生長(zhǎng)、侵襲及凋亡的影響。具體內(nèi)容如下:1ERQ46
2、在結(jié)直腸癌及癌旁正常組織中的表達(dá)水平用逆轉(zhuǎn)錄一實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),檢測(cè)ERQ46在結(jié)直腸癌及其相對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織中的表達(dá),分析該指標(biāo)的改變及其與各臨床病理指標(biāo)(臨床分期、年齡、分化程度)的關(guān)系。結(jié)果表明:在大腸癌組織中,ERQ46的表達(dá)顯著低于相應(yīng)的癌旁『F常組織(戶0008)。但ERQ46的表達(dá)與大腸癌浸潤(rùn)深度及分化程度無(wú)相關(guān)性(乃005)。2ERQ46真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)為了獲得ERa46cDNA,本課題以pcDNA3卜
3、ERQ66為模板,經(jīng)PCR,擴(kuò)增得到1400bpcDNA片段,克隆于pGEM—TEasy載體,經(jīng)DNA測(cè)序并與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)序列進(jìn)行比對(duì),證實(shí)該cDNA片段即為預(yù)期的含ERQ46全長(zhǎng)編碼區(qū)的cDNA。用肪DRl酶切將該片段克隆至真核表達(dá)載體pcDNA31(),并經(jīng)酶切鑒定。將上述表達(dá)ERa46的載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌細(xì)胞HT一29,經(jīng)Westernblot鑒定該蛋白表達(dá)在HT一29細(xì)胞中。3ERQ46的表達(dá)對(duì)HT一29細(xì)胞增殖、侵襲及
4、凋亡功能的影響應(yīng)用MTT法檢測(cè)ERQ46介導(dǎo)的雌激素對(duì)HT一29細(xì)胞體外生長(zhǎng)能力的影響,結(jié)果表明,在雌激素的作用下,轉(zhuǎn)染ERQ46的HT一29細(xì)胞的增殖能力明顯低于轉(zhuǎn)染空載體的對(duì)照細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明轉(zhuǎn)染ERQ46的HT一29細(xì)胞,G吖期細(xì)胞比例增多,而G:/M期細(xì)胞比例減少。體外侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,在雌激素的作用下,轉(zhuǎn)染ERQ46的HT一29細(xì)胞的侵襲能力低于對(duì)照組(尺005)。進(jìn)一步DNAFragmentation檢測(cè)表明,在雌激素的
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