細胞因子佐劑IL-23、IL-27對RSV重組蛋白疫苗安全性和保護性的影響.pdf

1、目的：自從呼吸道合胞病毒(RSV)被發(fā)現(xiàn)以來，一直是嬰幼兒嚴重下呼吸道感染的重要病原。但目前尚無有效有效解決措施，WHO已將RSV疫苗確定為優(yōu)先發(fā)展的疫苗。G:125-225-F/M2:81-95(G1F/M2)是一種前期研制的RSV重組亞單位蛋白疫苗，包括含CX3C基序和中和表位的G:125-225(G1)蛋白片段和RSV基質蛋白的CTL表位M2:81-95將其免疫小鼠后產(chǎn)生了Th1/Th2混合型的免疫應答，但Th2應答仍占優(yōu)勢，RS

2、V攻擊后，肺部的炎癥性病理損傷仍未完全解決。本實驗用細胞因子佐劑IL-23、IL-27單獨或聯(lián)合以及同CpG佐劑聯(lián)合與疫苗一起免疫小鼠，觀察IL-23、IL-27單獨或聯(lián)合其他佐劑使用對G1F/M2的免疫病理的調節(jié)作用。
　　 方法：
　　 1.大量提取pcDNA3.1/myc-HisB質粒、pcDNA3.1/myc-HisB-mIL-23質粒、pcDNA3.1/myc-HisB-mIL-27質粒。E.coil表達、親和

3、層析純化G1F/M2蛋白。
　　 2.培養(yǎng)RSV并測定TCID503動物實驗3.1用佐劑和G1F/M2共同免疫小鼠：
　　 將6周齡雌性BALB/c小鼠隨機分為8組，每組6只，分別為：(1)IL-23+G1F/M2組，(2)IL-27+G1F/M2組，(3)IL-23+IL-27+G1F/M2組，(4)pcDNA3.1+G1F/M2組，(5)IL-23+CpG2216+G1F/M2組，(6)IL-27+CpG2216+G

4、1F/M2組，(7)G1F/M2組，(8)PBS組。質粒提前兩天經(jīng)肌肉注射，蛋白經(jīng)腹腔注射，共免疫3次，每次間隔10天。每次免疫后10天取血，第三次為14天，分離血清用間接ELISA法測定三次免疫后的血清IgG抗體效價，觀察不同組合對體液免疫的影響。第3次免疫后2周處死小鼠取脾細胞，LDH法檢測CTL活性：ELISPOT法檢測分泌IL-4和IFN-γ的淋巴細胞水平；流式細胞儀檢測CD4+、CD8+細胞的效應記憶和中央記憶致的?？傊?，組合