Ⅰ型菌毛對鼠傷寒沙門氏菌體內(nèi)侵襲能力的影響.pdf

1、沙門氏菌(Salmonella)為腸桿菌科沙門氏菌屬成員，是一類條件性細(xì)胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性腸桿菌，血清型眾多，是人與動物的重要致病菌。 沙門氏菌菌毛是細(xì)菌表面的纖細(xì)結(jié)構(gòu)，與細(xì)菌粘附上皮細(xì)胞及在小腸粘膜定植有關(guān)。Ⅰ型菌毛是靜止培養(yǎng)時唯一表達(dá)的菌毛，其結(jié)構(gòu)與功能是各種菌毛中研究最為清楚的一種。前期體外研究證明，沙門氏菌Ⅰ型菌毛與細(xì)菌粘附與侵襲宿主細(xì)胞有關(guān)。本研究在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步體內(nèi)研究，以小鼠為模型，通過LD50與侵襲試驗(yàn)，證實(shí)

2、鼠傷寒沙門氏菌Ⅰ型菌毛對細(xì)胞毒力的影響。 本研究針對沙門氏菌Ⅰ型菌毛進(jìn)行的研究主要有以下幾個方面： 1.把質(zhì)粒穩(wěn)定系統(tǒng)hok-aphA-parDE成功克隆到能表達(dá)沙門氏菌Ⅰ型菌毛的pACYC184載體上，經(jīng)測序確定hok-aphA-parDE序列與GenBank上公布的相應(yīng)序列具有100％的同源性。測定了質(zhì)粒穩(wěn)定系統(tǒng)hok-aphA-parDE對質(zhì)粒穩(wěn)定性的作用。結(jié)果顯示，沒有質(zhì)粒穩(wěn)定系統(tǒng)的質(zhì)粒在細(xì)菌培養(yǎng)12-24h后開

3、始丟失，而含穩(wěn)定系統(tǒng)的質(zhì)粒在連續(xù)培養(yǎng)10代或120h都未發(fā)生丟失。這證明aphA-hok-parDE序列顯著增強(qiáng)了質(zhì)粒的穩(wěn)定性。 2.用半數(shù)致死量(LD<,50>)檢測沙門氏菌Ⅰ型菌毛對細(xì)菌毒力的影響。把能表達(dá)沙門氏菌Ⅰ型菌毛的質(zhì)粒和不能表達(dá)沙門氏菌Ⅰ型菌毛的質(zhì)粒同時轉(zhuǎn)入已經(jīng)缺失了invA基因、lpfC基因和Ⅰ型菌毛fim基因的鼠傷寒沙門氏菌中，同時測定這兩種細(xì)菌的LD<,50>。結(jié)果顯示，能表達(dá)沙門氏菌Ⅰ型菌毛的細(xì)菌毒力顯著下

4、降，其半數(shù)致死量較不能表達(dá)沙門氏菌Ⅰ型菌毛的細(xì)菌高76倍。 3.把能表達(dá)沙門氏菌Ⅰ型菌毛的細(xì)菌和不能表達(dá)沙門氏菌Ⅰ型菌毛的細(xì)菌等量混合后對BALB/c小鼠灌胃接種，不同時間段撲殺小鼠，以細(xì)菌計(jì)數(shù)法檢測血液，PPS(派伊爾氏結(jié))，腸系膜淋巴結(jié)，肝臟和脾臟各器官中這兩種細(xì)菌的數(shù)目，從而揭示了沙門氏菌Ⅰ型菌毛在細(xì)菌體內(nèi)侵襲中所起的作用，同時也揭示了細(xì)菌在體內(nèi)擴(kuò)散的相關(guān)規(guī)律。經(jīng)過多次重復(fù)試驗(yàn)顯示，能表達(dá)沙門氏菌Ⅰ型菌毛的細(xì)菌侵襲能力相對