非傷寒沙門氏菌臨床株毒力基因初步分析.pdf

1、目的：
　　采用PCR擴增和DNA序列分析技術(shù)，檢測急性腹瀉患者分離的非傷寒沙門氏菌（NTS）毒力基因攜帶情況與特點，探討感染人體的NTS菌株血清型、分子分型、耐藥表型與毒力基因攜帶的關(guān)系，為預(yù)防與控制NTS感染提供依據(jù)。
　　方法：
　　1、毒力基因檢測：實驗菌株為2012年～2013年分離自天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腸道門診急性腹瀉患者糞便標本的45株NTS，包括12個血清型、23個PFGE型和13個MLST型；以毒力島

2、SPI1～5基因sitC、hilA、sseL、sifA、mgtC、siiE、sopB毒性質(zhì)?；騪rot6E、pefA、spvB和DNA毒素基因cdtB和調(diào)控基因phoP為目的基因，進行PCR擴增，并對cdtB陽性的菌株cdtB、pltA、pltB基因的全長進行擴增。
　　2、PCR產(chǎn)物序列分析：從每個目的基因的PCR擴增陽性產(chǎn)物中隨機挑選1株進行測序分析；對cdtB及其相關(guān)基因pltA和pltB進行全長擴增測序，用BLAST和C

3、lustalX分析其DNA序列以及推導(dǎo)出的氨基酸序列與GenBank中代表性菌株序列的相似性。
　　3、毒力基因攜帶與抗菌藥物敏感性統(tǒng)計分析：使用SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。毒力基因攜帶與對抗菌藥物的敏感性用Fisher精確計算進行統(tǒng)計，P<0.05視為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1、45株NTS毒力基因檢出率依次為：sitC、hilA、mgtC、siiE、sopB、phoP100％，sseL、sifA97

4、.78%，prot6E31.11%，pefA、spvB37.78%，cdtB2.22%。與GenBank中對應(yīng)的參考序列相似性分別是sitC98%、hilA98%、siiE99%、spvB100%、prot6E100%、sifA99%、mgtC100%、sopB99%、sseL100%、pefA99%、phoP100%、cdtB99%。
　　2、毒力島基因：45株NTS全部檢測到了sitC、hilA、mgtC、siiE、sopB；

5、除了菌株406，其余44株都檢測到sifA基因；除了菌株25，其余44株都檢測到sseL基因。
　　3、毒性質(zhì)?；颍喝?4株腸炎血清型沙門氏菌，無論PT型如何，都檢測到了位于質(zhì)粒上的毒力基因prot6E、spvB、pefA；全部9株鼠傷寒血清型沙門氏菌中，3株ST19型檢測到spvB和pefA，prot6E則陰性，它們的PT型分別為PT04和PT20，而另外6株ST34型都沒有得到以上3種基因陽性擴增產(chǎn)物；其他血清型菌株也均未

6、得到這3種基因陽性擴增產(chǎn)物。
　　4、cdtB基因：有1株格蘭扁血清型沙門氏菌檢測到了cdtB基因，測序結(jié)果顯示cdtB長819bp，其相關(guān)基因pltA長729bp，pltB長414bp；各編碼269AA、243AA、140AA長的多肽鏈。序列比對結(jié)果顯示cdtB與Genbank中的沙門氏菌的相似性在93.1%～99.5%，氨基酸序列相似性為92.6%～99.3%；pltA與Genbank中的沙門氏菌的同源性在81.5%～99.6

7、%，氨基酸序列相似性為78.2%～100.0%；pltB與Genbank中的沙門氏菌的同源性在64.3%～99.0%，氨基酸序列相似性為69.1%～100.0%。
　　5、毒力基因與抗菌藥物敏感性的關(guān)系：萘啶酸的敏感性與prot6E、spvB、pefA相關(guān)，P值均<0.001；四環(huán)素的敏感性與prot6E、spvB、pefA相關(guān)，P值分別是0.044、0.017、0.017；鏈霉素的敏感性與prot6E相關(guān)，P值為0.046。其他

8、抗菌藥物敏感性與本次檢測的毒力基因未見統(tǒng)計學(xué)相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　1、所有實驗菌株中都含有毒力島SPI1～5代表性基因，SPI1～5可能是非傷寒沙門氏菌感染人體所必需。
　　2、毒性質(zhì)粒基因prot6E可能是腸炎血清型沙門氏菌的特有基因。鼠傷寒沙門氏菌攜帶毒性質(zhì)?；蚩赡芘cMLST分型有關(guān),應(yīng)高度警惕本地區(qū)MLST19型鼠傷寒沙門氏菌進化為耐藥性更強、致病力更高的菌株。
　　3、首次在格蘭扁血清型中發(fā)現(xiàn)了cd