核因子Kb受體活化因子及其配體在糖尿病大鼠腎臟中的表達(dá)及氯化鋰的防治作用.pdf

1、目的：1.通過(guò)檢測(cè)糖尿病腎病(DN)大鼠模型腎組織中RANK-RANKL表達(dá)來(lái)探討其在DN發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的意義。2.研究氯化鋰對(duì)糖尿病腎病大鼠模型腎組織中RANK/RANKL表達(dá)水平的影響，探討其治療糖尿病腎病的可行性及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：清潔級(jí)SD雄性大鼠24只，稱重，隨機(jī)分成3組：正常組(Z組)、模型組(M組)、治療組(L組)，M組、L組大鼠予以大劑量鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射造1型糖尿病模型，Z組以等量檸檬酸-檸檬酸三鈉

2、緩沖液注射。以腹腔注射72小時(shí)后隨機(jī)血糖值≥16.65mmol/L作為造模成功的判定標(biāo)準(zhǔn)。造模10周后以24小時(shí)尿蛋白定量≥30mg或超過(guò)Z組尿蛋白的10倍，作為糖尿病腎病成模的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)L組大鼠腹腔注射氯化鋰15mg/kg，予Z組、M組大鼠等量生理鹽水腹腔注射，觀察用藥后的相關(guān)指標(biāo)。檢測(cè)血糖、24小時(shí)尿微量白蛋白，留存大鼠腎組織標(biāo)本，HE染色觀察各組大鼠腎組織病理變化，免疫組化觀察并檢測(cè)RANK/RANKL表達(dá)水平，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)各

3、組大鼠RANK mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，造模大鼠中1只未達(dá)到糖尿病模型標(biāo)準(zhǔn)，模型成功率為93.8％（15/16）。共死亡4只，死亡率16.7%。
　　2.一般指標(biāo)觀察：
　　體重：4周、10周時(shí)(造模后第4周、第10周末) M組、L組大鼠體重低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；12周時(shí)(治療后第2周)，模型組M、治療組L大鼠體重較正常組Z組大鼠明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

4、.05)，治療組L大鼠體重高于模型組M，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　血糖：4周、10周及12周 M組、L組大鼠血糖均明顯高于Z組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但M組、L組大鼠之間血糖無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　24小時(shí)尿微量白蛋白：4周時(shí)糖尿病腎病模型成功，M組、L組大鼠尿蛋白水平高于Z組，有顯著性差異(P<0.05)；10周時(shí)，M組、L組大鼠尿蛋白水平明顯高于Z組，有顯著性差異(P<0.05)；M

5、組、L組之間差異無(wú)顯著性(P>0.05)。12周M組、L組大鼠尿蛋白水平高于Z組，有顯著性差異(P<0.05)；L組尿蛋白水平低于M組，有顯著性差異(P<0.05)。
　　3.組織病理學(xué)觀察：M組大鼠腎組織表現(xiàn)為腎小球肥大，系膜基質(zhì)增多，基底膜增厚，腎小動(dòng)脈硬化；小管基底膜增厚，管腔狹窄、閉塞，間質(zhì)水腫、纖維化等變化。L組大鼠毛細(xì)血管基底膜輕度增厚，系膜基質(zhì)增多，但較M組有所減輕，腎小管水腫減輕，管腔狹窄程度較M組減輕。
　

6、　4.免疫組化：Z組RANK-RANKL的少量表達(dá)，M組部分腎小球和腎小管中可見(jiàn)有RANK-RANKL明顯表達(dá)，較同期Z組表達(dá)明顯升高，有顯著性差異(P<0.05)，L組RANK-RANKL的表達(dá)較M組下降，有顯著性差異(P<0.05),但仍高于Z組。
　　5.實(shí)時(shí)定量PCR：M組、L組大鼠腎組織RANK mRA的表達(dá)明顯高于Z組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；L組大鼠腎組織RANK mRA的表達(dá)較M組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(