日本鰻鱺的C-型和g-型溶菌酶基因及其功能研究.pdf

1、溶菌酶是一種能水解由N-乙酰葡萄糖胺(NAG)和N-乙酰胞壁酸(NAMA)形成的β-1，4糖苷鍵的酶，在免疫反應(yīng)中有重要作用。本研究以日本鰻鱺(Anguilla japonica)為研究對(duì)象，根據(jù)日本鰻鱺基因組數(shù)據(jù)庫，預(yù)測(cè)并擴(kuò)增出2類，共5個(gè)溶菌酶基因，其中1個(gè)C-型溶菌酶，4個(gè)G-型溶菌酶，分別命名為AJLysC、AJLysG1、AJLysG2、AJLysG3、AJLysG4。它們的cDNA全長(zhǎng)分別為811、749、1352、1175

2、和733 bp，分別編碼143、193、185、185和187aa。經(jīng)SignalP預(yù)測(cè)，AJLysC和AJLysG1的N-端分別包括15和19aa的信號(hào)肽，另外3種溶菌酶不具有信號(hào)肽?；蚪M分析顯示，AJLysC，AJLysG2，AJLysG3，AJLysG4的基因結(jié)構(gòu)和其他魚類相似，C-型溶菌酶具有4個(gè)外顯子，G-型則具有5個(gè)。但是，AJLysG1的基因結(jié)構(gòu)與其他魚類G-型溶菌酶的不同，具有6個(gè)外顯子，這是魚類中首次發(fā)現(xiàn)有6個(gè)外顯子

3、的G-型溶菌酶基因。與其他魚類的溶菌酶比對(duì)發(fā)現(xiàn)，AJLysG1缺失其他G-型溶菌酶通常認(rèn)定的第2個(gè)酶活性位點(diǎn)氨基酸，Asp。AJLysC與其他很多物種的C-型溶菌酶具有較高的同一性，如與牙鲆的同一性為72.7％; G-型溶菌酶中AJLysG2，AJLysG3，AJLysG4彼此之間以及與其他物種G-型溶菌酶的同一性相對(duì)較高，而AJLysG1與其他物種以及如前所述3種G-型溶菌酶的同一性均不高，并且都在50％以下。
　　組織表達(dá)分析

4、顯示，所有5個(gè)溶菌酶基因在12種檢測(cè)的組織中均有表達(dá)。其中C-型溶菌酶在胃及免疫相關(guān)的組織表達(dá)量較高;G-型溶菌酶在在各組織/器官中的表達(dá)則差異較大，例如，AJLysG1在皮膚和肌肉中的表達(dá)量最高，AJLysG2在免疫組織/器官如血液、頭腎、體腎和鰓中表達(dá)量較高。經(jīng)遲緩愛德華氏菌刺激48小時(shí)后，這5個(gè)溶菌酶基因在大部分組織/器官中的表達(dá)量均有上調(diào)，其中在血液，腸道和頭腎等組織的上調(diào)較為顯著。此外，本研究還構(gòu)建了AJLysG2，AJLys