高糖刺激足細胞產(chǎn)生微囊泡及其機制的初步研究.pdf

1、目的:
　　 觀察高糖對體外培養(yǎng)的小鼠腎小球足細胞MV產(chǎn)生的影響，初步探討其產(chǎn)生機制。
　　 方法:
　　 體外培養(yǎng)小鼠足細胞系MPC-5。
　　 應(yīng)用ELISA法檢測足細胞MV產(chǎn)生，流式細胞儀檢測足細胞凋亡，免疫熒光法檢測足細胞ROS產(chǎn)生，Western blotting法檢測足細胞p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38和p-JNK/JNK蛋白的表達。
　　 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計

2、軟件進行數(shù)據(jù)處理分析。多組數(shù)據(jù)采用單因素方差分析（ANOVA），Tukey法檢驗，p＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。應(yīng)用Image-Pro Plus6.0軟件分析熒光強度，測定ROS。應(yīng)用Image J分析Western blotting圖像的目標帶光密度值。
　　 結(jié)果:
　　 1.隨高糖孵育時間的延長，MVs產(chǎn)生隨之增加，呈時間依賴性（圖3）。24h時足細胞產(chǎn)生的MVs大約是0h的4倍(p＜0.01)，48h時足細胞產(chǎn)

3、生的MVs大約是0h的12倍(p＜0.01)。
　　 2.高糖對足細胞凋亡的影響:與NC組相比，MN組凋亡率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)，HG組可見明顯細胞凋亡(p＜0.01)，凋亡率幾乎增加了1倍。
　　 3.高糖對足細胞ROS產(chǎn)生的影響:熒光顯微鏡觀察顯示隨高糖刺激時間延長，ROS產(chǎn)生呈上升趨勢，呈時間依賴性。半定量分析結(jié)果顯示，12h、24h、48h、72h的ROS分別是0h的1.4倍、1.7倍、2.3倍、1.

4、7倍，均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)。其中48h時ROS產(chǎn)生達峰(p＜0.01)，隨后開始降低，72 h時可見明顯降低(p＜0.01)，但仍處于較高水平。
　　 4.高糖對足細胞p-ERK1/2/ERK1/2、p-p38/p38和p-JNK/JNK蛋白表達的影響:(1)隨高糖處理時間延長，p-ERK1/2蛋白相對表達量呈上升趨勢，0.5h時p-ERK1/2蛋白相對表達量明顯增多(p＜0.01)，是0h的2倍，2h、4h、6h、

5、12h時分別是0h的2、2.3、2.7、2.2倍(p＜0.01)，可見6h達峰，12h時明顯降低(p＜0.01)，但仍處于較高水平;(2)隨高糖處理時間延長，p-p38蛋白相對表達量呈先升高后降低趨勢，0.5h時p-p38蛋白相對表達量明顯增多(P＜0.01)，是0h的7.6倍，2h、4h、6h時分別是0h的8.8、7.1、6.3倍(p＜0.01)，12h時降低至基礎(chǔ)水平;(3) HG處理各時間點間p-JNK蛋白相對表達量差異無統(tǒng)計學(xué)意

6、義(p＞0.05)。
　　 5.ERK抑制劑對足細胞MVs產(chǎn)生的影響:HG+ERKi組與HG組相比，MVs產(chǎn)生差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.232)。
　　 結(jié)論:
　　 1.高糖能刺激足細胞MVs產(chǎn)生和ROS生成，呈時間依賴性，伴隨足細胞凋亡的發(fā)生。
　　 2.高糖環(huán)境下，ERK1/2通路和p-38MAPK通路活化。
　　 3.ERK抑制劑U0126未能降低高糖刺激足細胞MVs產(chǎn)生，ERK1/2通路