2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、研究目的:本課題主要研究氧化應(yīng)激在糖尿病腎病足細(xì)胞損害過程中的作用,作為綠茶主要活性成分EGCG能否通過抗氧化作用來阻止糖尿病腎病的進(jìn)展。本研究以高糖刺激下體外小鼠足細(xì)胞為研究對(duì)象,以維生素E為對(duì)照,探討EGCG對(duì)足細(xì)胞活性氧生成的影響及對(duì)NADPH氧化酶各亞基表達(dá)的影響從而探討其作用機(jī)制;不同濃度EGCG對(duì)高糖環(huán)境下足細(xì)胞細(xì)胞周期影響和細(xì)胞周期依賴型蛋白激酶抑制劑(CDKIS)表達(dá)的影響以探討其作用機(jī)制;不同濃度EGCG對(duì)高糖環(huán)境下足

2、細(xì)胞凋亡的影響,并探討其作用機(jī)制。 研究方法:以高糖刺激下小鼠足細(xì)胞株為為研究對(duì)象,以不同濃度EGCG和維生素E干預(yù)后:1. MTT法檢足細(xì)胞活性2.DCFH-DA標(biāo)記熒光探針在激光掃描共聚焦顯微下檢測(cè)ROS,流式細(xì)胞儀檢測(cè)足細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度(mean fluroscent intensity ,MFI),比較EGCG對(duì)高糖環(huán)境下足細(xì)胞活性氧ROS生成的影響3采用相差顯微鏡下觀察足細(xì)胞形態(tài)的改變4.. BrdU ELISA法檢測(cè)

3、細(xì)胞增殖和流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期5.Annexin V-FITC法檢測(cè)足細(xì)胞凋亡,Hoechst 33258染色激光共聚焦顯微鏡觀察凋亡小體。6. 采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)NADPH氧化酶亞基ph22phoxmRNA、p47phoxmRNA、p67phoxmRNA表達(dá)影響探討活性氧生成機(jī)制;細(xì)胞周期依賴型蛋白激酶抑制劑P21 Cip1mRNA和 P27 KipmRNA1表達(dá)的影響探討對(duì)細(xì)胞周期影響;RT-PCR檢

4、測(cè)TGF-β1mRNA表達(dá)探討足細(xì)胞凋亡機(jī)制。 研究結(jié)果:1. 高糖刺激下6小時(shí)足細(xì)胞活性氧生成增加,正常糖組和甘露醇組培養(yǎng)12小時(shí)活性氧生成無顯著差異。EGCG(0.2umol/L)作用6小時(shí)可明顯降低高糖環(huán)境下體外小鼠足細(xì)胞活性氧(MFI)水平。EGCG(100umol/L)對(duì)NADPH氧化酶亞基p22phox和p67phoxmRNA表達(dá)減少差異顯著,EGCG(0.2umol/L)和維生素E(0.2mmol/L)協(xié)同作用組對(duì)

5、p47phoxmRNA減少減少差異顯著。2. 隨刺激葡萄糖濃度上升,部分細(xì)胞脫落,呈不規(guī)則形態(tài)。以正常糖為對(duì)照,高糖刺激24小時(shí)后,足細(xì)胞增殖差異不顯著,48和72小時(shí)后足細(xì)胞增殖減少,差異顯著;以高糖組為對(duì)照,高糖刺激24小時(shí),維生素E組和維生素E、EGCG協(xié)同作用組促進(jìn)足細(xì)胞增殖差異顯著,EGCG(0.2,10,100uM)作用組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;48小時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和24小時(shí)相同;72小時(shí) EGCG(100uM)維生素E組和維生素E、

6、EGCG協(xié)同作用組促進(jìn)足細(xì)胞增殖作用差異顯著。不同濃度EGCG干預(yù)24小時(shí)足細(xì)胞周期G1/G0期、S期、G2/M期百分比差異不顯著,干預(yù)72小時(shí)對(duì)足細(xì)胞時(shí)足細(xì)胞周期G1/G0期、S期、G2/M期百分比差異顯著;EGCG干預(yù)24小時(shí)細(xì)胞周期依賴型蛋白激酶抑制劑P21 Cip1mRNA和 P27 Kip1mRNA表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3. EGCG(20uM)、EGCG(2.0uM)、維生素E及EGCG協(xié)同作用組減少足細(xì)胞早期凋亡比例差異顯著,

7、以高糖組為對(duì)照,隨EGCG濃度上升,TGF-β1mRNA表達(dá)下降差異不顯著。 結(jié)論:EGCG能緩解高糖環(huán)境下體外足細(xì)胞氧化應(yīng)激狀態(tài),對(duì)高糖培養(yǎng)下足細(xì)胞有保護(hù)作用,EGCG明顯減少NADPH氧化酶活性可能是高糖環(huán)境下活性氧生成減少的重要機(jī)制;EGCG(100uM)作用72小時(shí)促進(jìn)高糖環(huán)境下足細(xì)胞增殖,EGCG(0.2,10,100uM)作用72小時(shí)減少足細(xì)胞周期G1/G0期、S期,延長G2/M期,促進(jìn)足細(xì)胞增殖;高糖刺激后24小時(shí)

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