來(lái)氟米特對(duì)高糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞裂孔隔膜及細(xì)胞骨架影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 1.通過(guò)建立體外高糖刺激的足細(xì)胞模型，檢測(cè)足細(xì)胞NF-κ B、TRPC6、nephrin、F-actin的表達(dá)情況及A771726干預(yù)的影響并探討其可能的作用機(jī)制。
　　 2.初步探討A771726對(duì)體外高糖培養(yǎng)足細(xì)胞保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 條件永生的人腎小球足細(xì)胞株分為正常糖組、甘露醇高滲對(duì)照組、高糖刺激組、高糖+PDTC（pyrrolidine dithiocar

2、bamate為NF-κ B通路特異性抑制劑）組及高糖+A771726（來(lái)氟米特活性代謝產(chǎn)物）組。
　　 用Western印跡法測(cè)定足細(xì)胞NF-κ Bp65途徑的活化即p-NF-κ Bp65/ NF-κ Bp65比值，Western印跡法、半定量RT-PCR測(cè)定NF-κ Bp65、TRPC6、nephrin在腎小球足細(xì)胞的表達(dá)。免疫熒光染色法檢測(cè)足細(xì)胞骨架的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.高糖刺激足細(xì)胞激活NF-κ

3、Bp65信號(hào)通路，60min時(shí)p-NF-κ Bp65蛋白表達(dá)與0min比顯著增加（1.20±0.04比0.79±0.02，P＜0.01）;正常糖組和高滲對(duì)照組僅有少量NF-κ Bp65活化;PDTC及A771726可明顯抑制p-NF-κ Bp65表達(dá)(P＜0.05)，NF-κ Bp65 mRNA表達(dá)各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.高糖刺激足細(xì)胞激活NF-κ Bp65信號(hào)通路后，TRPC6 mRNA及蛋白表達(dá)

4、較正常組高，nephrin mRNA及蛋白表達(dá)較正常組降低;PDTC及A771726可抑制TRPC6高表達(dá)，使nephrin表達(dá)較高糖組增多（均P＜0.05）。
　　 3.免疫熒光法檢測(cè)高糖刺激足細(xì)胞72h后可見(jiàn)細(xì)胞骨架蛋白微絲肌動(dòng)蛋白(F-actin)紊亂及張力纖維消失。
　　 結(jié)論:
　　 來(lái)氟米特活性代謝產(chǎn)物A771726可通過(guò)阻斷高糖誘導(dǎo)的NF-κ Bp65信號(hào)通路的活化對(duì)足細(xì)胞起保護(hù)作用。