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文檔簡介
1、目的:本研究首先成功建立新生SD大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)模型,聯(lián)合及分別給予重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)和重組人促紅細(xì)胞生成素(recombinant human erythropoietin,rh-EPO)干預(yù),觀察各個(gè)組SD大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)運(yùn)
2、動(dòng)行為學(xué)變化、腦組織HE染色的病理改變、腦組織細(xì)胞凋亡,外周血細(xì)胞變化,探討聯(lián)合應(yīng)用rhG-CSF和rh-EPO發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
方法:7日齡SD大鼠160只,雌雄不限,體重12~18g,隨機(jī)分為五組:假手術(shù)組,HIBD模型組,rh-EPO治療組,rhG-CSF治療組,rh-EPO、rhG-CSF聯(lián)合應(yīng)用治療組,每組均為32只。HIBD模型組、rh-EPO治療組、rhG-CSF治療組及聯(lián)合應(yīng)用治療組,均先制備HIBD模型:先
3、雙重結(jié)扎大鼠左側(cè)頸總動(dòng)脈,從中間剪段,然后置于含8%O2和92%N2的低氧環(huán)境中,放置2h制備而成,即改良Rice法,治療組在HIBD后即刻(分別或聯(lián)合)給予rh-EPO(5000 U/kg)腹腔注射,每日一次,連續(xù)五天,rhG-CSF(60μg/kg)頸部皮下注射,每日一次,連續(xù)五天;五組根據(jù)大鼠處死時(shí)間不同,分為4個(gè)亞組即6h組、24h組、72h組、7d組,每亞組均為8只。不同時(shí)間點(diǎn)觀察各組運(yùn)動(dòng)行為學(xué)變化,腦組織病理變化,腦組織細(xì)胞
4、凋亡及檢測外周血細(xì)胞變化,所檢測的數(shù)據(jù)結(jié)果采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
結(jié)果:(1)行為:7日齡SD大鼠在模型制成后均出現(xiàn)不同程度的行為異常。(2)腦組織外觀:假手術(shù)組腦組織均正常,無水腫及缺血壞死等改變;模型組外觀各時(shí)間點(diǎn)可出現(xiàn)不同程度的水腫、萎縮及液化壞死,rh-EPO、rhG-CSF分別治療組各時(shí)間點(diǎn)腦組織輕度的水腫、萎縮等改變,無明顯的液化壞死,而聯(lián)合治療組各時(shí)間點(diǎn)腦組織外觀基本正常。(3)HE染色:①
5、假手術(shù)組:在不同的時(shí)間點(diǎn)腦組織結(jié)構(gòu)清楚、細(xì)胞無水腫及壞死;②HIBD模型組:在建模后6h出現(xiàn)細(xì)胞間隙增大,腦組織細(xì)胞可出現(xiàn)水腫、變性等病理改變;24h細(xì)胞間隙進(jìn)一步增大,腦組織細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的變形、壞死,神經(jīng)細(xì)胞核出現(xiàn)溶解;72h細(xì)胞間隙顯著增大,壞死細(xì)胞數(shù)目明顯增多;7d時(shí)細(xì)胞排列比較紊亂,神經(jīng)元數(shù)目明顯減少,膠質(zhì)細(xì)胞明顯增生;③rhG-CSF、rh-EPO分別治療組比相應(yīng)的HIBD模型組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)病理變化減輕:早期細(xì)胞水腫、變性好
6、轉(zhuǎn),中后期細(xì)胞壞死較減少,膠質(zhì)細(xì)胞增生減少。④聯(lián)合治療組比相應(yīng)的分別治療組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)病理變化明顯好轉(zhuǎn),細(xì)胞排列規(guī)則,膠質(zhì)細(xì)胞增生不明顯,無明顯的液化灶。(4)TUNEL法檢測腦細(xì)胞凋亡:HIBD組、rhG-CSF組、rh-EPO組、聯(lián)合應(yīng)用組與假手術(shù)組比較,HIBD組及治療組在相對應(yīng)的每個(gè)時(shí)間點(diǎn)腦組織細(xì)胞凋亡數(shù)目顯著升高(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。聯(lián)合應(yīng)用組與rhG-CSF、rh-EPO分別治療組各個(gè)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較腦細(xì)胞凋亡數(shù)顯
7、著降低(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而rhG-CSF組與rh-EPO組之間各個(gè)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較腦細(xì)胞凋亡數(shù)無明顯差別(P>0.05),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。假手術(shù)組腦細(xì)胞凋亡數(shù):3.45±0.95個(gè);HIBD組、rhG-CSF組、rh-EPO組、聯(lián)合應(yīng)用組腦細(xì)胞凋亡在6h分別為48.12±8.86、41.04±6.39、39.8±7.38、33.8±9.38;24h分別為58.12±7.84、49.36±7.83、50.31±6.86、
8、36.14±6.32;72h分別為66.38±8.18、54.32±8.01、53.62±5.89、40.13±8.23;7d分別為56.46±6.78、34.23±7.16、36.37±6.25、25.36±4.48。(5)外周血細(xì)胞變化:rhG-CSF組、rh-EPO組、聯(lián)合應(yīng)用組與HIBD組、假手術(shù)組比較各個(gè)時(shí)間點(diǎn)外周血中白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)值無顯著升高(P>0.05),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;rhG-CSF組、rh-EP
9、O組分別治療組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)外周血中白細(xì)胞、紅細(xì)胞與聯(lián)合應(yīng)用組值無顯著升高(P>0.05),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。假手術(shù)組、HIBD組、rhG-CSF組、rh-EPO組、聯(lián)合應(yīng)用組外周血中WBC(×109/L)值分別為:6h為5.37±1.18、5.48±1.79、6.86±1.54、6.41±1.68、7.15±1.79;24h為6.77±2.29、7.17±2.91、8.26±2.48、6.07±1.83、7.44±2.42;72h為6.
10、91±1.52、6.49±2.93、7.08±1.75、7.47±2.74、8.31±1.82;7d為6.69±1.18、6.53±2.01、7.65±1.48、7.31±2.21、8.53±1.73;RBC(×1012/L)值分別為:6h為3.15±0.29、3.28±0.37、3.13±0.31、3.33±0.41、3.32±0.43;24h為3.13±0.31、3.23±0.33、3.23±0.39、3.34±0.43、3.45±
11、0.43;72h為3.12±0.33、3.28±0.12、3.23±0.35、3.44±0.41、3.49±0.45;7d為3.23±0.33、3.28±0.32、3.25±0.35、3.54±0.46、3.51±0.42。
結(jié)論:(1)rh-EPO、rhG-CSF聯(lián)合應(yīng)用比單一應(yīng)用對7日齡SD大鼠HIBD后更能明顯改善腦組織的水腫、壞死等病理改變,說明rhG-CSF或rh-EPO對新生大鼠HIBD具有神經(jīng)保護(hù)作用,兩者聯(lián)合應(yīng)
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