載脂蛋白L1自身調(diào)控機制的初步研究.pdf

1、動脈粥樣硬化是嚴重影響人類健康的疾病,目前公認,動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病,動脈血管的損傷與內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞在炎癥因子等危險因素刺激下許多功能失代償有關(guān)其中包括了增值、凋亡、自噬等功能的失代償,而脂類代謝紊亂恰好參與了動脈粥樣樣硬化的炎癥機制。APOL1是近些年發(fā)現(xiàn)的新型載脂蛋白,其血漿濃度與高脂血癥相關(guān),其自噬功能可能與斑塊穩(wěn)定相關(guān),故APOL1可能與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。但是APOL1在動脈粥樣硬化中的具體作用及自身

2、調(diào)控機制目前尚不清楚,因此,APOL1自身調(diào)控的機制研究顯得尤為重要,進而為其在血脂代謝中的作用、其自噬功能在動脈粥樣硬化中發(fā)生發(fā)展中的作用及機制研究做準備。本實驗成功夠建了APOL1調(diào)控區(qū)(-1918nt~+265nt)及各分段的克隆,將其通過轉(zhuǎn)染的方法導入細胞,通過雙熒光素酶報告檢測試驗發(fā)現(xiàn)APOL1的調(diào)控區(qū)-1918nt~+265nt在肝癌Huh7細胞株轉(zhuǎn)錄活性最強;-80nt~+265nt幾乎保留了調(diào)控區(qū)-1918nt~+265

3、nt全部轉(zhuǎn)錄活性。將調(diào)控區(qū)-80nt~+265nt利用TESS、TFsearch、TFbind、JASPAR軟件預測,確定了5個潛在的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點SP/KLF(1)、SP/KLF(2)、HNF3、IRF、INR。將潛在轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點通過定點突變的方法進行突變,除了SP/KLF(2)位點外其余的4個轉(zhuǎn)錄活性都降低了。將INF-γ干預Huh7細胞,發(fā)現(xiàn)其對APOL1轉(zhuǎn)錄的上調(diào)作用主要是通過IRF轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點發(fā)揮作用的。結(jié)論:1、初