復(fù)合OP-1多肽水凝膠緩釋系統(tǒng)對(duì)小鼠成骨細(xì)胞ALP、OC和Cbfα1表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察OP-1和復(fù)合OP-1多肽水凝膠緩釋系統(tǒng)對(duì)小鼠成骨細(xì)胞(MC3T3-E1) ALP、OC和Cbfal蛋白表達(dá)的影響，探討OP-1對(duì)成骨細(xì)胞分化的促進(jìn)作用和復(fù)合OP-1多肽水凝膠緩釋系統(tǒng)緩慢釋放OP-1并促進(jìn)成骨細(xì)胞分化的作用及可能機(jī)制，為進(jìn)一步研究復(fù)合OP-1多肽水凝膠緩釋系統(tǒng)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)分為3組，即OP-1組、OP-1/水凝膠組和對(duì)照組.無(wú)菌圓玻片平鋪于無(wú)菌24孔培養(yǎng)板底，將傳代后的MC

2、3T3-E1以細(xì)胞密度5×104個(gè)/ml接種在各組圓玻片上，每孔培養(yǎng)液均為200μl，置37℃、5％ CO2、95％濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。其中OP-1/水凝膠組在接種細(xì)胞前每孔圓玻片周邊涂布25μl OP-1多肽水凝膠緩釋系統(tǒng)(25μl RADA16包封50 ng thOP-1)；OP-1組在細(xì)胞接種后吸去等體積培養(yǎng)液加入50ng thOP-1；對(duì)照組則不采用任何措施。在1d、4d、7d、10 d、14 d各時(shí)間點(diǎn)，吸去培養(yǎng)板中培養(yǎng)液，輕輕

3、取出細(xì)胞爬片，立即用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)各組細(xì)胞ALP、OC和Cbfal的表達(dá)。應(yīng)用Motic Med6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析，獲得平均灰度值(最黑的灰度值為O，最白的灰度值為255，灰度值越小，陽(yáng)性表達(dá)越多)。應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，采用單因素方差分析對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：⑴免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，ALP、OC和Cbfal陽(yáng)性著色主要位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)

4、內(nèi)棕黃色顆粒。⑵OP-1組細(xì)胞培養(yǎng)1d細(xì)胞質(zhì)內(nèi)ALP、OC無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，而Cbfal有陽(yáng)性表達(dá)，與對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.05)，表達(dá)量略多于對(duì)照組.培養(yǎng)4 d、7d、10d、14 d，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)ALP、OC、Cbfal均有陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)量均明顯多于對(duì)照組(p<0.05)。培養(yǎng)7d，ALP、Cbfal表達(dá)量達(dá)高峰，而OC在10d表達(dá)量達(dá)高峰。⑶OP-1/水凝膠組細(xì)胞培養(yǎng)1d細(xì)胞質(zhì)內(nèi)ALP、OC均無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，而Cbfal有陽(yáng)性表達(dá)，但

5、與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05).培養(yǎng)4 d、7d、10 d，14 d，ALP、OC、Cbfal均有陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)量均明顯多于對(duì)照組(P<0.05).培養(yǎng)4d、7 d、10 d，ALP表達(dá)量均少于OP-1組(P<0.05)，培養(yǎng)14 d與OP-1組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。培養(yǎng)4 d、7d、10 d、14 d，OC表達(dá)量均少于OP-1組(P<0.05)。培養(yǎng)1 d、4d、7d、10d， Cbfal表達(dá)量均少于OP-1組(