膠質(zhì)瘤干細胞分離、鑒定及其化療耐藥性研究.pdf

1、目的：通過體外細胞實驗初步探討膠質(zhì)瘤干細胞（glioma stem cells，GSCs）對膠質(zhì)瘤化療耐藥的影響，證明GSCs的存在是膠質(zhì)瘤耐藥的重要因素之一。
　　 方法：將三株膠質(zhì)瘤細胞株SHG-44、LJ251、U87MG分別接種于含有生長因子的無血清培養(yǎng)基，通過無血清懸浮培養(yǎng)法篩選含有大量GSCs的干細胞球并分離；鑒定GSCs用RT-PCR法檢測膠質(zhì)瘤干細胞的GFAP、CD133 mRNA的表達；掃描電鏡觀察GSCs的形

2、態(tài)；比較三株GSCs倍增曲線；CCK8法檢測化療藥物作用時間、濃度變化對膠質(zhì)瘤細胞及其干細胞增殖活性及生長抑制率的影響。
　　 結(jié)果：從三株膠質(zhì)瘤細胞中分離出的GSCs，可在體外增殖及傳代，倍增時間分別為：140h、150h、160h，并表達特異性標(biāo)志物CD133。順鉑及長春新堿對膠質(zhì)瘤及其干細胞均有抑制作用，呈濃度、劑量依賴性，且劑量效應(yīng)關(guān)系顯著。膠質(zhì)瘤干細胞組細胞抑制率明顯低于膠質(zhì)瘤細胞組（P均<0.01）。順鉑干預(yù)膠質(zhì)瘤及

3、其干細胞時間不同（24h，48h），細胞抑制率強弱順序在GSCs類型上有所不同。而長春新堿干預(yù)時間長短對膠質(zhì)瘤細胞及其干細胞細胞抑制率強弱順序無明顯影響。
　　 結(jié)論：CD133可作為GSCs鑒定的標(biāo)志物及預(yù)測預(yù)后的指標(biāo)之一；GSCs有自我更新和增殖能力；GSCs對化療藥物（順鉑、長春新堿）明顯耐藥，是導(dǎo)致膠質(zhì)瘤耐藥的重要因素之一；CCK8法可作為檢測GSCs化療藥物的敏感性的篩選方法；U251及U251-GSCs對順鉑較敏感，