缺血后適應(yīng)對兔腸道急性缺血再灌注損傷的保護作用研究.pdf

1、目的：1)建立兔小腸急性缺血再灌注損傷模型，確定合適的腸系膜上動脈阻斷時間；2)確定缺血后適應(yīng)對急性兔腸道缺血再灌注損傷保護作用的時間及可能的機制。
　　 方法：
　　 1．健康新西蘭兔用于建立急性腸道缺血再灌注損傷模型和缺血后適應(yīng)模型2．確定新西蘭兔腸系膜上動脈阻斷時間。將70只新西蘭兔隨機按不同的腸系膜缺血時間(0、15、30、45、60min)分為A、B、C、D、E共五組，每組14只。每組取8只用于恢復(fù)血供2小時后

2、留取各組兔下腔靜脈血標本及腸組織，檢測血清中丙二醛(MDA)含量的變化，光鏡下觀察小腸組織形態(tài)學(xué)變化并對小腸粘膜損傷程度進行評分。另6只用于術(shù)后24h、48h及72h生存率的觀察。根據(jù)再灌注2小時后確定滿足血清中MDA含量增加且腸粘膜損害又能保證生存率＞80％的缺血時間。
　　 3．缺血后適應(yīng)的干預(yù)方法。缺血后適應(yīng)分為2組，第一組(IpostC1)于缺血后再灌注前行3個30s灌注+30s阻斷后充分開放再灌注，另一組(IpostC

3、2)于缺血后再灌注前行3個60s灌注+60s阻斷后充分開放再灌注。
　　 4．新西蘭兔隨機分為4組：假手術(shù)組(S組)、缺血再灌注(I/R)組、缺血后適應(yīng)1(IpostC1)組、缺血后適應(yīng)2(IpostC2)。各組分別于充分開放再灌注120mins、120mins、117mins、114mins后沿原切口入腹直視下下腔靜脈穿刺取血5ml。在無菌原則下取距回盲部約20cm的近端小腸組織5cm左右。血標本收集后，常溫下靜置30min，

4、3000r/min離心15min，分離的血清保存干－20℃冰箱，待所有標本收集完后一次性檢測。采用MDA、MPO測定試劑盒檢測血清中組織MDA、MPO含量的變化。一部分腸組織用40g/L甲醛溶液固定，用石蠟包埋，切片，蘇木素-伊紅(HE)染色行組織病理學(xué)檢查。腸組織病理評分采用雙盲法按Chiu6級評分法分析。一部分腸組織立即凍存于-80℃冰箱用于腸道組織中MDA、MPO含量的測定。
　　 結(jié)果：
　　 在腸缺血再灌注損傷

5、模型建立過程中，行腸系膜上動脈阻斷0、15、30、45、60min后充分再灌注2h，發(fā)現(xiàn)阻斷腸系膜上動脈30min，再灌注2h是建立兔小腸急性再灌注損傷的合適時間。A、B、C組的生存率均＞83.3％。C、D、E組的MDA含量及腸粘膜損傷評分與A組比較，差異均有顯著性(F=12.13～280.24,P＜0.01)。
　　 缺血后適應(yīng)干預(yù)兔腸道缺血再灌注損傷顯示：再灌注120分鐘后，各組腸道組織MDA含量較S組明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)

6、意義(t=19.76～49.84，P＜0.01)，提示缺血再灌注損傷的存在。雖然IpostC1組的MDA含量(6.13±0.40)也高于S組(3.36±0.18)，有統(tǒng)計學(xué)差異(t=19.97,P＜0.01)，但卻明顯低于I/R組(t=49.84，P＜0.01)，說明30sec缺血后適應(yīng)方案在再灌注120分鐘后可以在一定程度上減輕細胞脂質(zhì)過氧化程度，減輕細胞損傷。IpostC2組的MDA含量(8.18±0.75)高于I/R組，但統(tǒng)計學(xué)分

7、析顯示兩者差異無顯著性(t=1.86,P＞0.05)。說明60sec缺血后適應(yīng)方案在再灌注120分鐘后不能減輕細胞脂質(zhì)過氧化程度，減輕細胞損傷。
　　 再灌注120分鐘后，各組腸道MPO含量較S組明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=14.07～17.59，P＜0.01)，進一步提示缺血現(xiàn)灌注損傷的存在。雖然IpostC1組中MPO含量(2.11±0.33)高于S組含量(0.32±0.23)，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(t=14.07，P＜0.

8、01)，但卻明顯低于I/R組含量(2.65±0.35)，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(t=3.54,P＜0.01)，進一步說明30sec缺血后適應(yīng)方案在再灌注120分鐘后可以在一定程度上減輕中性粒細胞浸潤，減輕細胞的損傷。IpostC2組的MPO含量(2.72±0.42)高于I/R組，但統(tǒng)計學(xué)無差異(t=0.41，P＞0.05)，進一步說明60sec缺血后適應(yīng)方案在再灌注120分鐘后不能減輕中性粒細胞浸潤，減輕細胞的損傷。
　　 與S組相比

9、，I/R組及缺血后處理組血清中MDA含量及MPO含量明顯增加(P＜0.01)。與I/R組相比，采用30sec缺血后適應(yīng)方案能明顯減少MDA及MPO的產(chǎn)生(P＜o．01)，但仍然高于S組(P＜0.05)，而采用60sec缺血后適應(yīng)方案不能減少血清中MDA和MPO的含量(P＞0.05)。
　　 再灌注120分鐘后，I/R組的CHIU評分(3.1±0.72)明顯高于S組(0.60±0.70)，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(t=24.79,P＜0.

10、01)，說明缺血再灌注可導(dǎo)致明顯的腸粘膜病理損傷，IpostC1組的評分值(1.8±0.88)也明顯高于S組，有顯著統(tǒng)計學(xué)學(xué)差異(t=3.37,P＜0.01)，但IpostC1組的評分值卻明顯低于I/R組，有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(t=3.62，P＜0.01)，說明30sec缺血后適應(yīng)方案可以在一定程度上減輕缺血再灌注損傷引起的腸粘膜的病理損傷。IpostC2組的評分值(3.7±0.92)也明顯高于S組，有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(t=8.39,P＜0

11、.01)，但IpostC2組的評分值(3.7±0.92)卻明顯高于I/R組的評分(3.1±0.72)，但統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.15，P＞0.05)，說明60sec缺血后適應(yīng)方案不能減輕缺血再灌注損傷引起的腸粘膜的病理損傷，甚至有加重腸粘膜損傷的趨勢。
　　 結(jié)論：
　　 1．阻斷新西蘭兔腸系膜上動脈30min，再灌注2h,是建立急性腸道缺血再灌注損傷模型的合適時間，既能保證一定的腸道損傷，又能保證術(shù)后24小時

12、生存率＞80％。
　　 2．缺血后再灌注前(30s灌注+30s阻斷)3次循環(huán)的缺血后適應(yīng)方法能夠有效降低新西蘭兔缺血30分鐘再灌注2小時造成的血清及腸道組織中丙二醛和髓過氧化物酶水平的升高。經(jīng)缺血后適應(yīng)處理后，小腸絨毛損傷明顯減輕，上皮與固有層分離減少，中性粒細胞浸潤減輕。提示缺血后適應(yīng)對缺血再灌注所致的腸道功能和組織形態(tài)學(xué)損傷都有保護作用。
　　 3．缺血后適應(yīng)能夠降低腸道組織缺血再灌注所致升高的MDA、MPO含量，有