缺血后適應(yīng)對(duì)大鼠腎臟熱缺血再灌注早期損傷的保護(hù)作用及其機(jī)理研究.pdf

1、缺血再灌注損傷(Ischemic reperfusion injury，IRI)是導(dǎo)致急性腎功能衰竭的主要原因之一，也是移植腎功能延遲恢復(fù)重要的非抗原依賴性因素，并可增加慢性移植物腎病發(fā)病的危險(xiǎn)指數(shù)。目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)IRI的防治措施包括缺血前干預(yù)(缺血預(yù)適應(yīng)、藥物預(yù)處理、縮短缺血時(shí)間等)和缺血后干預(yù)(低溫保存，灌注液灌洗，低溫灌注、控制灌注壓灌注、乏氧血灌注等)，但是仍舊無(wú)法徹底防治IRI。多數(shù)藥物是針對(duì)IRI的某一特定環(huán)節(jié)發(fā)揮作用，缺血

2、預(yù)適應(yīng)受到缺血不可預(yù)見(jiàn)性的限制，乏氧、低溫、低壓灌注存在操作復(fù)雜、不易控制的缺點(diǎn)。2003年，Zhao等在大鼠心臟IRI模型上證實(shí)了在缺血后再灌注之前進(jìn)行反復(fù)短暫的血流阻斷干預(yù)處理(缺血后適應(yīng))可以減輕IRI。隨后的研究進(jìn)一步證實(shí)了缺血后適應(yīng)對(duì)狗、大鼠和兔的心臟和大鼠肝臟IRI的保護(hù)作用。本課題在建立大鼠腎臟熱叫模型的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究缺血后適應(yīng)對(duì)大鼠腎臟熱IRI的防治效果和作用機(jī)制。 方法 1．健康Wistar大鼠用于

3、建立大鼠腎臟熱叫模型和缺血后適應(yīng)模型 2．確定大鼠左腎鉗夾的缺血時(shí)間。將大鼠隨機(jī)分為四組，每組10只。分別鉗夾腎蒂Omin、30min、45min和60min。根據(jù)再灌注24h后腎功能檢測(cè)指標(biāo)和大鼠存活情況確定既能滿足腎功能?chē)?yán)重?fù)p害又能保證24h生存率>80[％]的缺血時(shí)間。 3．確定缺血后適應(yīng)的干預(yù)效果。缺血后適應(yīng)方法分為2組，第一組(Pos-Conl)于缺血后再灌注前行6個(gè)10s無(wú)限制灌注+10s再缺血循環(huán)后充分開(kāi)放

4、灌注，另一組(Pos-Con2)于缺血后再灌注前分別行2min、3min、5min、7min再灌注，其間行4次2min再缺血后充分開(kāi)放灌注。 4．大鼠隨機(jī)分為5組：對(duì)照組、I/R組、Pos-Conl組、Pos-Con2組和腺苷預(yù)處理組。各組大鼠均于充分開(kāi)放再灌注24h后采集血液和左腎組織標(biāo)本。檢測(cè)血清尿素氮(Blood urea nitrogen，BUN)和血清肌酐(Serum creatinine，Scr)水平；部分。腎組織作

5、蘇木素和伊紅(Hematoxylinand eosin，HE)染色，進(jìn)行常規(guī)病理學(xué)檢查。 5．另外部分腎組織分別用于檢測(cè)超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)和丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量和采用TUNEL，RT．PCR檢測(cè)原位凋亡及凋亡調(diào)控基因Bcl-2/Bax的表達(dá)情況。 結(jié)論 1．缺血后再灌注前(10秒無(wú)限制灌注+10秒再缺血)6次循環(huán)的缺血后適應(yīng)方法能夠有效

6、降低大鼠腎臟熱缺血60分鐘再灌注24小時(shí)造成的血清肌酐和尿素氮水平升高。經(jīng)缺血后適應(yīng)處理之后，腎小管上皮細(xì)胞、腎小球形態(tài)結(jié)構(gòu)相對(duì)正常，壞死區(qū)域明顯減少，凋亡減輕，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。提示缺血后適應(yīng)對(duì)缺血再灌注所致的。腎臟功能和組織形態(tài)學(xué)損傷皆有保護(hù)作用。2．缺血后適應(yīng)可以提高腎臟缺血再灌注所致下降的SOD酶活性和降低腎組織升高的MDA含量，有效減輕缺血再灌注所致腎臟過(guò)氧化損傷。 3．Pos-Conl干預(yù)能有效減輕腎小管上皮細(xì)胞的